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上皮細胞是指位於皮膚或腔道表層的細胞。

1 上皮細胞 -簡介

上皮細胞上皮細胞
上皮細胞的形狀有扁平,柱狀等等。

皮膚外層的上皮細胞普遍角質化,有保護和吸收的作用。

腔道中的上皮細胞多分化,有分泌,排瀉和吸收等功能。

2 上皮細胞 -分類

上皮細胞上皮細胞
1、上皮細胞按細胞層數可分為單層復層兩類。

2、上皮細胞按形狀可分為柱狀鱗狀

柱狀上皮細胞:主要分佈於鼻腔、鼻咽、器官、肺、胃、腸、子宮頸、子宮內膜及輸卵管等部位。

鱗狀上皮細胞:被覆於全身皮膚、口腔、喉部、鼻咽的一部分、食道、陰道的全部以及子宮頸。鱗狀上皮細胞分為基底層細胞、中層細胞和表層細胞。

3 上皮細胞 -上皮細胞培養

1)表皮細胞培養

上皮細胞人視網膜色素上皮細胞

1.取材:取外科植皮或手術殘餘皮膚小塊,以角化層薄者為佳,早產流產兒皮膚更好,切成0.5~1平方厘米小塊。

2.EDTA處理:先置入0.02%EDTA中室溫置5分鐘。

3.冷消化:換入0.25%胰蛋白酶中,置4℃過夜。

4.分離:取出皮膚,用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。

5.溫消化:取出表皮單獨處理,用剪刀剪成更小的塊后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分鐘。

6.用吸管輕輕反覆吹打,使成細胞懸液。

7.培養液:通過80目不鏽鋼紗網濾過後,低速離心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,製成細胞懸液,接種入碟皿中,CO2溫箱培養

2)乳腺組織培養

上皮細胞上皮細胞

直接培養法:(適於培養含纖維少的軟組織)

1.在含有少量培養液或Hanks液的容器中,用鋒利刀片將組織反覆切割成碎塊。

2.把組織碎塊連同液體注入離心管中,再補加少許培養液,用吸管吹打片刻,置試管架3~5分鐘。吸除上層液可排除非乳腺細胞部分。重複2~3次。

3.末次處理結束后,向沉降管中再補加培養液,用吸管稍吹打,使沉降物重懸。不待細胞團塊下降立即通過3~4層無菌紗布濾入另管中。

4.調整好適宜密度,接種入培養瓶中培養。

膠原酶消化法:(適於處理含纖維多的較硬組織)

其過程與培養其它組織相同。

3)胃上皮細胞培養

1.取材:取胃潰瘍或胃癌手術切除胃標本遠端非病變區粘膜少許。

2.清洗:用含慶大黴素(400微克/毫升)和二性黴素(2微克/毫升的Hanks)液漂洗后,用鈍器剝離下粘膜,剪成1mm3大小。

3.消化:在I型膠原酶和透明質酸酶中,於37℃中消化80分鐘。

4.離心:收集細胞懸液,800轉/分離心后,Hanks液漂洗兩次。

5.接種:末次離心后加入含有1%~2%胎牛血清的完全培養基,接種入不同孔數的培養板中,接種量依不同實驗目的而定。

4)肝細胞培養

初代組織塊培養:取新鮮肝臟,先剝除被膜和血管等纖維成分,用刀或剪刀把肝臟剪成1mm3左右的小塊,採用帖壁培養法。

5)內皮細胞培養

1.取產後的新鮮臍帶。如不立即培養可以保存於4℃中,但不宜超過12小時。無菌剪取長10~15厘米一段。其它如胚胎和幼體動物的大血管,亦可用於培養。

2.先用三通注射器吸溫PBS液注入臍帶的靜脈中,洗除殘血,注入口處宜用線繩結紮,以防液體返流。

3.用血管鉗夾緊臍帶一端,從另端向臍靜脈中徐徐注入最終濃度為0.1%的膠原酶,待末端出現液體后結紮之,令充滿血管,注入口亦應結紮,以防液體返流,消化3~10分鐘。

4.吸出含有內皮細胞的消化液,注入離心管中,為獲取更多細胞,可再注入溫PBS沖洗2~3次徹底清除乾淨殘餘細胞,一併注入離心管中離心。

5.吸除上清,加1640培養液,製成細胞懸液,接種入瓶皿中培養,順利時2~3天內細胞即可長成單層。

6)毛細血管內皮細胞培養

腫瘤條件培養基製備:

1.取C3H小鼠的S-180實體肉瘤組織。

2.胰蛋白酶消化,Dulbecco改良Eagle氏培養液15ml(含10%小牛血清),接種到T-75 Falcon產培養瓶中培養。

3.在細胞生長接近完全匯合時,收集培養液製成條件培養基;再用含10%小牛血清的新培養液后,也每隔兩天收集一次,可獲得多量條件培養

4.4000轉/分離心后,再通過0.22μm微孔濾膜濾過,-20℃凍存備用(臨用前融解)。

4 上皮細胞 -上皮細胞分類

上皮組織分為被覆上皮、腺上皮和感覺上皮三類,而通常所說的上皮就是指被覆上皮。

上皮細胞按細胞層數可分為單層和復層兩類,按形狀可分為柱狀和鱗狀。   

柱狀上皮細胞:主要分佈於鼻腔、鼻咽、器官、肺、胃、腸、子宮頸、子宮內膜及輸卵管等部位。

 鱗狀上皮細胞:被覆於全身皮膚、口腔、喉部、鼻咽的一部分、食道、陰道的全部以及子宮頸。鱗狀上皮細胞分為基底層細胞、中層細胞和表層細胞。

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