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不對稱PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一對引物,PCR擴增后產生大量的單鏈DNA(SSDNA).這對引物分別稱為非限制引物與限制性引物,其比例一般為50~100∶1.在PCR反應的最初10~15個循環中,其擴增產物主要是雙鏈DNA,但當限制性引物(低濃度引物)消耗完后,非限制性引物(高濃度引物)引導的PCR就會產生大量的單鏈DNA.不對稱PCR的關鍵是控制限制性引物的絕對量,需多次摸索優化兩條引物的比例.還有一種方法是先用等濃度的引物PCR擴增,製備雙鍵DNA,(dsDNA),然後以此dsDNA為模板,再以其中的一條引物進行第二次PCR,製備ssDNA.不對稱PCR製備的ssDNA,主要用於核酸序列測定. 不對稱PCR(Asymmetric PCR)的基本原理是採用不等量的一對引物產生大量的單鏈DNA(ss-DNA)。這兩種引物分別稱為限制性引物與非限制性引物;其最佳比例一般為1:50~1:100,關鍵是限制引物的絕對量。限制性引物太多太少,均不利於製備ss-DNA。也可用普通PCR製備靶DNA雙鏈DNA(ds-DNA),再以ds-DNA為模板,只用其中一種過量引物進行單引物PCR製備ss-DNA。
產生的ds-DNA與ss-DNA由於分子量不同可以在電泳中分開,而得到純ss-DNA。
不對稱PCR主要為測序製備ss-DNA,尤為用c-DNA經不對稱PCR進行DNA序列分析是研究真核DNA外顯子的好方法。
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