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二硫腙比色法

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二硫腙比色法也稱雙硫腙比色法,是食品分析和檢驗科學中常用於檢驗和分析食品中的鋅的含量的一種分析方法。

1 二硫腙比色法 -原理

  樣品經消化后,在pH4.0~4.5時,鋅離子與二硫腙生成紫紅色配合物,溶於四氯化碳,與標準系列相比較進行定量。

  

二硫腙比色法反應方程式
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2 二硫腙比色法 -試劑

  1.C(CH3COONa)=2mol/L乙酸鈉溶液:稱取68g乙酸鈉(CH3COONa·3H2O),加水稀釋至250ml。

  2.C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液:量取10.0ml冰乙酸,加水稀釋至85ml。

  3.乙酸-乙酸鹽緩衝溶液C(CH3COONa)=2mol/L乙酸鈉溶液與C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液等體積混合,此溶液PH為4.7左右。用0.01%二硫腙四氯化碳溶液提取數次,每次10ml,除去其中的鋅,至四氯化碳層綠色不變為止,棄去四氯化碳層,再用四氯化碳提取乙酸-乙酸鹽緩衝液中過剩的二硫腙,至四氯化碳層無色,棄去四氯化碳層。

  4.1:1氨水。

  5.C(HCl)=2mol/L鹽酸:最取10ml鹽酸,加水稀釋至60ml。

  6.C(HCl)=0.02mol/L鹽酸:吸取1ml C(HCl)=2mol/L鹽酸,加水稀釋至100ml。

  7.酚紅指示劑:0.1%乙醇溶液。

  8.20%鹽酸羥胺溶液:稱取20g鹽酸羥胺,加60ml水,滴加1:1氨水,調節PH至4.0-5.5,以下操作同乙酸-乙酸鹽緩衝溶液的處理。然後加水稀釋至100ml。

  9.25%硫代硫酸鈉溶液:用C(CH3COOH)=2mol/L乙酸溶液調節PH至4.0-5.5。以下按試劑3中用0.01%二硫腙-四氯化碳溶液,處理。

  10.0.01%二硫腙-四氯化碳溶液。

  

二硫腙比色法

11.二硫腙使用液:吸取1.0ml的二硫腙-四氯化碳溶液,加四氯化碳至10.0ml,混勻。用1cm比色杯,以四氯化碳調節零點,于波長530nm處測吸光度(A),用下式計算出配製100ml的二硫腙使用液(57%透光率)所需0.01%二硫腙-四氯化碳溶液毫升數(V)。‍

  12.鋅標準溶液:準確稱取0.1000g鋅,加10mlC(HCl)=2mol/L鹽酸,溶解后移入1000ml溶量瓶中,加水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當於100μg。

  13.鋅標準使用液:吸取1.0ml鋅標準溶液,置於100ml的容量瓶中,加1mlC(HCl)=2mol/L鹽酸,以水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當於1μg鋅。

3 二硫腙比色法 -儀器

  分液漏斗、分光光度計。

4 二硫腙比色法 -操作方法

  1.樣品的消化:同「砷的測定」中硝酸-高氯酸-硫酸法或硝酸-硫酸法。

  2.標準曲線的繪製

  吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml鋅標準使用液,分別置於125ml分液漏斗中,各加入C(HCl)=0.02mol/L鹽酸至20ml。漏斗中,備加c(HcL)=o.02M1兒鹽酸至20m1。然後分別加入10ml乙酸-乙酸鹽緩衝液、1m125%硫代硫酸鈉溶液,搖勻,再各加入10.0ml二硫腙使用液,劇烈振搖2min。靜置分層后,四氯化碳層經脫脂棉濾入lcm比色杯中,以零管調節零點,于波長530nm處測定吸光度、繪製標準曲線或求出回歸方程。

  3.樣品溶液和試劑空白液油定

  吸取5.0ml~10.0ml消化后定容的樣品溶液和相同量的試劑空白液,分別置於125m1分液漏斗中,加5m1水、0.5ml20%鹽酸羥胺溶液,搖勻,再加2滴酚紅指示劑,用1:1氨水調至紅色,再多加2滴。再加5ml 0.01%二硫腙-四氯化碳溶液,劇烈振搖2min,靜置分層。將四氯化碳層移入另一分液漏斗中,水層用少量二硫腙-四氯化碳溶液振搖提取,每次2mL~3ml,直至二硫腙-四氯化碳溶液綠色不變為止。合併提取液,用5m1水洗滌,四氯化碳層用C(HCl)=0.02mol/L鹽酸提取2次,每次10ml,提取時劇烈振搖2min,合併C(HCl)=0.02mol/L鹽酸提取液,並用少量四氯化碳洗去殘留的二硫腙。以下自「加入l0ml乙酸-乙酸鹽緩衝溶液」起,按標準曲線繪製操作方法進行操作。根據測得吸光度從標準曲線上查得相當於鋅的含量,或將吸光度代入回歸方程求得鋅的含量。

5 二硫腙比色法 -計算

  

二硫腙比色法

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  ‍式中:

  a1——測定用樣品消化液中鋅的含量(μg)

  a0——試劑空白液中鋅的含量(μg);

  m——樣品質量(體積)[g(ml)];

  V1——樣品消化波速體積(nII);

  V2——測定用樣品消化液的體積(m1)。

6 二硫腙比色法 -注意事項

  1.測定時加入硫代硫酸鈉、鹽酸羥胺和在控制pH值的條件下,可防止銅、汞、鉛、鉍、銀和鎘等離子的干擾。並能防止二硫腙被氧化。

  2.所用玻璃儀器用10%一20%硝酸浸泡24h以上,然後用不含鋅的蒸餾水沖洗潔凈。

  3.硫代硫酸鈉是較強的配合劑,它不僅配合干擾金屬,同時也與鋅配合.所以只有使鋅從配合物中釋放出來,才能被二硫腙提取,而鋅的釋放又比較緩慢,因此必須劇烈根據2min。

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