別名:兩性電解質載體;Ampholyte solution; Ampholime    性狀:近無色至淺黃色透明液體。有粘性。為一種相對分子質量小於1000的,人工合成的多氨基多羧酸系列兩性化合物的複雜混合物。實際含量為40%的溶液,
   用途:用於生物大分子蛋白腖和酶的等電聚焦電泳。
原理:它在大於其等電點的pH環境中解離成帶負電荷的陰離子,向電場的正極泳動,在小於其等電點的pH環境中解離成帶正由荷的陽離子,向電場的負極泳動。這種泳動只有在等於其等電點的pH環境中,即蛋白質所帶的凈電荷為零時才能停止。
        兩性電解質必備的條件
1.可溶性要好,為了保證等電聚焦過程中PH梯度的形成和蛋白樣品的遷移,載體兩性電解質必須具有很好的溶解性能。
2.紫外吸收低,不發熒光。由於製備分離時,檢測蛋白質的方法通常是測量280cm的吸光度,因此要求載體兩性電解質在280cm的吸光度儘可能低。
3.在等電點處必需有足夠的緩衝能力,以便能控制pH梯度,而不致被樣品蛋白質或其他兩性物質的緩衝能力改變pH梯度的進程。
4.在等電點必需的足夠高電導,以便使一定的電流通過,而且要求具備不同pH值的載體有相同的電導係數,使整個體系中的電導均勻,如果有局部電導過小,就會產生極大的電位降,從而其他部分電壓就會太小,以致不能保持梯度,也不能使應聚焦的成分進行電遷移,達到聚焦。
5.分子量要小,便於與被分離的高分子物質用透析或凝膠過濾法分開。
6.化學組成應不同於被分離物質,不干擾測定。
7.無毒、無生物學效應。載體兩性電解質對哺乳動物的組織培養,酶活性測定,免疫檢測或注射到小白鼠或大鼠中都沒有影響。
8.應不與分離物質反應或使之變性。總起來說,當一個兩性電解質的等電點介於兩個很近的pk值之間時,它在等電點的解離度大,緩衝能力強,而且電導係數高,這 就是好的載體兩性電解質。
載體兩性電解質是一些具有相近等電點的分子量為600-900Da的多氨基多羥基兩性化合物的混合物,下面是配置不同pH範圍等電聚焦凝膠的載體兩性電解質的配方:
pH範圍
載體兩性電解質pH範圍
凝膠中的百分比%
3.5-10
3.5-10
2.4
4-6
3.5-10
4-6
0.4
2
6-9
3.5-10
6-8
7-9
0.4
1
1
9-11
3.5-10
9-11
0.4
2
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