1定義

調節鹽濃度,可使混合蛋白質溶液中的幾種蛋白質分段析出。如:血清球蛋白(50%(NH4)2SO4飽和度),清蛋白(飽和(NH4)2SO4)。

2分段鹽析的方法

對分離目的蛋白的鹽析,最好採用分段鹽析。由於不同的蛋白質其溶解度與等電點不同,沉澱時所需的pH值與離子強度也不相同,改變鹽的濃度與溶液的pH值,可將混合液中的蛋白質分批鹽析分開,這種分離蛋白質的方法稱為分段鹽析法(fractional saltingout)。如半飽和硫酸銨可沉澱血漿球蛋白,飽和硫酸銨則可沉澱包括血漿清蛋白在內的全部蛋白質。
1. 分段鹽析的條件先需要進行小實驗探索,如:先進行0%-30%的硫酸銨沉澱,再進行30%-60%的硫酸銨沉澱,最後進行60%-80%的硫酸銨沉澱。
2. 每一段鹽析靜置之後都將離心取沉澱,透析並檢測活性。通過實驗結果可以看出哪一段鹽析出來的目的產物最多,相對來說雜質就更少。
3. 比如實驗中的活性物質主要在60%-80%這段出來,在以後的實驗中,就可以首先進行0%-60%的硫酸銨沉澱,這段沉澱物可以拋棄(去處大多數雜質);然後進行60%-80%的硫酸銨沉澱,這段沉澱出來是物質是所需要的目的物質含量比較高的物質,將其收集進行下一步純化工作 。
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