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吡羅紅,即吡羅紅G,又名派洛寧,吡羅紅使RNA呈現紅色,常用於檢測細胞中RNA的分佈,與甲基綠一起混用。

 

1 吡羅紅 -吡羅紅

甲基綠—派洛寧
(methyl green-pyronin)為鹼性染料,它分別能與細胞內的DNA、RNA結合呈現不同顏色。當甲基綠與派洛寧作為混合染料時,甲基綠與染色質中DNA選擇性結合顯示綠色或藍色;派洛寧與核仁、細胞質中的RNA選擇性結合顯示紅色。其原因可能是兩種染料的混合染液中有競爭作用,同時兩種核酸分子都是多聚體,而其聚合程度有所不同。甲基綠易與聚合程度高的DNA結合呈現綠色。而派洛寧則與聚合程度較低的RNA結合呈現紅色(但解聚的DNA也能和派洛寧結合呈現紅色)。即RNA對派洛寧親和力大,被染成紅色,而DNA對甲基綠親和力大,被染成綠色。

關於吡羅紅和甲基綠分裝粉的使用方法

2 吡羅紅 -試劑及配製方法

(1)試劑 質量分數為0.9%的NaCl溶液,質量分數為8%的鹽酸,乙酸鈉,乙酸,蒸餾水,吡羅紅甲基綠混裝粉。如果化學試劑商店沒有吡羅紅甲基綠混裝粉,可以分別購買甲基綠和吡羅紅G,然後按A液的第二種方法配製(見下文)。

(2)染色劑的配製

①染色劑A液的兩種配製方法

第一種方法:取吡羅紅甲基綠粉1 g,加入到100 mL蒸餾水中溶解,然後用濾紙過濾,將濾液放入棕色瓶中備用。

第二種方法:取甲基綠2 g溶於98 mL蒸餾水中,取吡羅紅G 5 g溶於95 mL蒸餾水中。取6 mL甲基綠溶液和2 mL吡羅紅溶液加入到16 mL蒸餾水中,即為A液,放入棕色瓶中備用。(注意:用於核酸染色的是吡羅紅G,請不要錯買吡羅紅B。)

②染色劑B液的配製方法 B液是一種緩衝液,由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4 g,用蒸餾水溶解至1 000 mL備用;再取乙酸12 mL,用蒸餾水稀釋至1 000 mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30 mL和稀釋的乙酸20 mL,加蒸餾水50 mL,配成pH為4.8的B液(緩衝液)。

③染色劑的配製 染色劑是由A液、B液混合配製而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合,就是實驗中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應該注意的是該試劑應現用現配。

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