標籤:培養基細胞培養基

培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料,一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素,用於單種微生物培養和鑒定。

1簡介

培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料,一般都含
培養基

  培養基

有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及生長素和水等。有的培養基還含有抗菌素、色素、激素和血清。
培養基由於配製的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在2~6℃的冰箱內。由於液體培養基不易長期保管,現在均改製成粉末。

2培養基的配製

1.配料
配方換算→在容器中加入少量水〔蒸餾水,自然水〕→按照配方稱取各種藥品〔依次加入〕→加足所需水量《一葯一勺,取葯后立即蓋上瓶蓋》。
2.溶解
澱粉溶解:少量冷水調成糊狀
加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95~97℃ ,且需要邊
加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調PH
用1N的鹽酸或的1N NaOH把培養基調節到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進行過濾。
5.分裝
一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養,則100 ml培養基/250 ml的三角瓶,最多不能超過150 ml培養基/250 ml的
三角瓶,否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養,則15~20 ml培養基/250
ml的三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養基一般裝4~5 ml,約試管的1/4高度;
固體斜面培養基一般裝3~4 ml,約試管的1/5高度。
6.包紮
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養
基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約佔試管長度的1/2。
9.貯存
培養基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放於4℃冰箱中備用

3化學分類

組合培養基
又稱為合成培養基或綜合培養基,是一類按微生物的營養要求精確設計後用多種高純化學試劑配製成的培養基。如葡萄糖銨鹽培養基、澱粉硝酸鹽培養基等。
液體培養基
一類配製成的液體狀態的基質。
液體培養基

  液體培養基

脫水培養基
又稱預製乾燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。

4微生物分類

選擇性培養基:一類根據某微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基,具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌的功能,廣泛用於菌種篩選等領域。
鑒別培養基:一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產物發生顯色反應的指示劑,從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養基。例如,伊紅美藍乳糖培養基(EMB)。

5常見培養基

放線菌培養基
澱粉硝酸鹽培養基(高氏一號培養基)
可溶性澱粉 2.0g 硝酸鉀0.1g 磷酸氫二鉀0.05g 氯化鈉0.05g 硫酸鎂0.05g 硫酸亞鐵0.001g 瓊脂2g 水100ml
先把澱粉放在燒杯里,用5毫升水調成糊狀后,倒入95毫升水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補足失水。調整pH值到7.2~7.4,分裝后滅菌,備用。
麵粉瓊脂培養基
麵粉60g 瓊脂20g 水1000ml
把麵粉用水調成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調勻,補充水分,調整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。
真菌培養基
薩市(Sabouraud』s)培養基
蛋白腖 10g 瓊脂20g 麥芽糖 40g 水1000ml
先把蛋白腖、瓊脂加水后,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解后,加入40g麥芽糖(或葡萄糖),攪拌,使它溶解,然後分裝,滅菌,備用。
本培養菌是培養許多種類真菌所常用的。
馬鈴薯糖瓊脂培養基
把馬鈴薯洗凈去皮,取200g切成小塊,加水1000ml,煮沸半小時后,補足水分。在濾液中加入10g瓊脂,煮沸溶解后加糖20g(用於培養黴菌的加入蔗糖,用於培養酵母菌的加入葡萄糖),補足水分,分裝,滅菌,備用。
把這培養基的pH值調到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。
豆芽汁培養基
黃豆芽100g 瓊脂15 g 葡萄糖20g 水1000ml
洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解後放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000ml,分裝,滅菌,備用。
把這培養基的pH值調到7.2~7.4,可用來培養細菌和放線菌。
豌豆瓊脂培養基
豌豆 80粒瓊脂 5g 水200ml
取80粒干豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾后,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用。
瓊脂

  瓊脂

煙草的培養基
在植物組織培養時,通過調節IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽
CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化
愈傷組織誘導培養基製備
以MS培養基母液為基礎,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配製得MS培養基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然後加入實際配製培養基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置於電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然後用蒸餾水定容至終體積2L,繼續加熱幾分鐘使之混合均勻後分裝於三角瓶中。
煙草葉片愈傷組織誘導
煙草

  煙草

取一無菌培養皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置於無菌培養皿中,並用解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然後將其接種於準備好的培養基上,每瓶接種5小片,一共接種6瓶。接種后的三角平置於24條件下黑暗培養1周,然後在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀察愈傷組織誘導結果,統計愈傷組織誘導率。
器官分化及植株再生培養
將誘導的愈傷組織按類型分別轉入分化培養基上,置於連續光照,溫度20-22 C條件下培養3周,統計愈傷組織再生植株情況.
愈傷組織誘導的總體情況
煙草愈傷組織誘導培養4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見表一中所示,6瓶培養物均有愈傷形成,且都未發生污染,但誘導率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為60.0℅, 在黑暗條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為46.7%.由於實驗過程中,外植體即煙草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小。
培養基配方的選定
同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規定進行配製外.一般均應盡量收集有關資料.加以比較核對.再依據自己的使用目的加以選用,記錄其來源。
培養基成分的稱取
培養基的各種成分必須精確稱取並要注意防止錯亂.最好一次完成,不要中斷。可將配方置於傍側,每稱完一種成分即在配方上做出記號,並將所需稱取的藥品一次取齊,置於左側,每種稱取完畢后,即移放於右側。完全稱取完畢后.還應進行一次檢查。
培養塞pH 的初步調整
培養基各成分完全溶解后,應進行pH 的初步調正,因培養基在加熱消毒過程中、pH 會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低pH0.2.而腸浸液pH 卻會有顯著的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的最終pH ,保證培養基的質量。pH 調正後,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉澱物的析出。
上一篇[結晶紫]    下一篇 [細菌素]

相關評論

同義詞:暫無同義詞