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多糖類化合物

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多糖類化合物是靈芝所含化學成分之一,現已證明,靈芝多糖類具有抗腫瘤作用、免疫調節作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用和抗衰老作用,故靈芝多糖類是靈芝的主要有效成分。臨床試驗也證實,靈芝多糖可作為腫瘤化學治療和放射治療的有效輔助治療葯。有關靈芝多糖類的分離、純化、結構確證的研究方興未艾,迄今仍為國內外矚目的重要課題。

目錄

 


1 多糖類化合物 -詳述

一、靈芝多糖類的分離、純化及鑒定 靈芝多糖類的分離、純化及結構確證的方法及步驟可概括如下:多採用熱水提取、分部沉澱的方式分離靈芝的多糖組分;進一步經各種層析如DEAE纖維素柱色譜、Sephadex G75柱色譜,凝膠過濾如Sepharose CL—4B凝膠過濾,高壓電泳和聚丙醯胺凝膠電泳等處理可獲純化的多糖;後者經酸水解、紙色譜、氣相色譜分析可確定其單糖組分,經酶水解可檢測殊碳糖(anomeric)結構;經甲基化技術及smith降解、氣相色譜、氣質聯用、紫外及紅外光譜分析、核磁共振等可確定多糖的連接方式和基本化學結構。多糖的分子量可通過凝膠柱色譜如SephadeaxG—100柱色譜、超離心測沉降係數等方法測定,一般在測得分子量範圍后,求出平均分子量。
二、靈芝多糖類的理化特性。由於靈芝的種類、產地、分離提取方法各異,所獲靈芝多糖的理化特性、分子量、單糖組分和連接方式不同,生物活性亦有差異。如Hiroshi等(1985)報道,赤芝子實體熱水提取物經濃縮、透析及系列色譜后獲得兩種多糖ganoderan A和B。ganoderan A的分子量9 300,旋光度【α】D+58.8°,ganoderan B分子量3 600,旋光度【α】+33.3°,二者對小鼠均具降血糖作用。隨後,他們又從赤芝子實體中分離出兩個降血糖有效成分ganoderan B和C,均為糖肽,分子量分別為7 400和5 800。物理化學和化學研究證明,ganoderan B含吡喃葡萄糖醯基β-1→3主鏈和β-1→6側鏈,ganoderan C則含D-吡喃葡萄糖醯基β-1→3和β-1→6連接和D-吡喃半乳糖醯基α-1→6連接。Mizuno等(1986)報告,赤芝子實體經85%乙醇(80℃),熱水(100℃),3%草酸銨(100℃)和5%氫氧化鈉(30℃)提取后,殘渣再用5%氫氧化鈉(含0.1%硼氫化鈉,80℃),20%氫氧化鈉(含0.1%硼氫化鈉,30℃)和5%氯化鋰(溶於二甲醋酸銨中,70℃)提取,獲多糖組分A、B、C。A和B經乙醇分離,醋酸沉澱,Sepharose CL-4B凝膠過濾,得4個β-葡聚糖,其中I和II來自A,III和IV來自B。從C分離出脫乙醯殼多糖(chitosan)(V)。I—V經80%甲酸(85℃)處理可獲相應的甲醯化多糖和低分子量多糖。I—IV主要由葡萄糖和少量的糖醛酸、木糖、甘露糖組成,並具β-(1→3)-D-葡聚糖主鏈和β-(1→6)葡萄糖基側鏈,其分子量分別為330 000、60 000、160 000和110 000。不同之處是IV不含木糖,但含1.2%蛋白質。V經酸水解后,主要含葡萄糖胺,並含少量葡萄糖,經紅外光譜和X射線分析證明為脫乙醯殼多糖。給小鼠腹腔注射II、III以及III的甲酸酯和I~IV的低分子量多糖均具有宿主中介性的抗腫瘤活性,半數抑瘤量(ID50)分別為42.5mg/kg、34.1mg/kg、70.2mg/kg、22.4mg/kg、17.0mg/kg、32.1mg/kg和25.8mg/kg。Mizuno等(1985)報告,赤芝子實體經水提取后,其殘渣經3%草酸銨溶液(100℃)和5%氫氧化鈉溶液(30℃)提取后,得2個水不溶多糖A和B。A經真空濃縮、透析、凍干,Shepharose CL-48凝膠過濾,獲主要組分C。B用醋酸中和至pH5~6,得酸性異多糖D,加乙醇沉澱得糖蛋白E和另一種異多糖。C由酸性β-D-葡聚糖構成,含葡萄糖77%、葡萄糖醛酸10.3%以及少量的果糖、木糖、甘露糖和半乳糖,分子量10 000~30 000。D的分離程序同A,它含兩個主要成分G和H,G和H均為酸性異多糖,分別含葡萄糖92%和95%,葡糖醛酸9.7%和13.0%以及少量果糖、木糖、甘露糖、乳糖,分子量70 000~100 000。給小鼠腹腔注射A—H對S180均具有抗腫瘤活性,50%抑瘤量為(6.3~26.3)mg/kg,但口服無效。1989~1994李榮芷、何雲慶等先後報告,赤芝子實體經熱水提取,乙醇分部沉澱、透析、除蛋白等步驟得靈芝多糖BN3A、BN3B、BN3C和GL-A、GL-B、GL-C。進一步經DEAE纖維素柱色譜分離,酶解,酸水解,過碘酸氧化,甲酸生成,Smith降解、氣相色譜、高壓液相色譜分析和光譜分析等從BN3B、BN3C、GL-A、GL-B和GL-C中共分離鑒定了18個靈芝多糖均一體,其中5個肽多糖、4個葡聚糖,其餘為雜多糖,其化學結構及分子量見表6-4。

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