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弗氏佐劑(Freundadjuvant),這是目前最常用於動物實驗的佐劑,它是將抗原水溶液與油劑(石蠟油或植物油)等量混合,再加乳化劑(羊毛脂或葉吐溫80)製成油包水抗原乳劑,稱之為不完全弗氏佐劑。如在不完全佐劑中加入分枝桿菌(如死卡苗)則稱為完全弗氏佐劑。

1 弗氏佐劑 -介紹

弗氏佐劑是現在動物實驗中最常用的佐劑,分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成,組分比為1~5:1,可根據需要而定,通常為2:1。不完全佐劑中加卡介苗(最終濃度為2~20mg/ml)或死的結核分枝桿菌,即為完全弗氏佐劑(FCA)。 一般首次注射時用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進行乳化,第二次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑,則抗原量增大10-20倍。
  

配製方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內,用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保存備用。
  

在免疫動物前,先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合,佐劑和抗原體積比一般為1:1,製備成 "油包水"乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化複合物,注射入動物體內時一定要保持乳化狀態。抗原用量視抗原分子量不同及免疫原性及免疫動物不同而有一定差異,無統一標準和固定模式。一般是每兔(約2kg重)或每羊(約20kg重)第1次注射抗原1mg,以後逐次增加抗原量,最多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進行:
  

(1) 研磨法:先將佐劑加熱並取適量放入無菌的玻璃研缽內,待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液,邊滴邊按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,繼續研磨一段時間,使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適於製備大量的佐劑抗原,缺點是研缽壁上粘附大量乳劑,抗原損失較大。
  

(2) 注射器混合法:將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內,兩注射器之間以一細膠管相連,注意排凈空氣,然後交替推動針管,直至形成粘稠的乳劑為止。本法優點是容易做到無菌操作,抗原損失少,適用於製備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全,個別抗原,用塑料注射器根本推不動,而用玻璃注射器又有滲漏。製備好的乳化劑經鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴狀浮於水面,即乳化完全,為合格的油包水劑。
  

(3) 超聲:實驗室條件好點的,比如說有超聲破碎儀的,一定要控制超聲頻率和時間,超聲容易激發一些自由基,對抗原有未知損害。乳化方法要根據抗原和需要而定。

2 弗氏佐劑 -其他免疫佐劑的物質

弗氏佐劑也屬於免疫佐劑。其他免疫佐劑的物質有:①微生物及其產物,常用的微生物有分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌以及處左蘭氏陰性桿菌的提取物脂多糖,自分枝桿菌的提取物質胞壁醯二肽等。②多聚核苷酸,如多聚肌苷酸:胞苷酸(poly1:C),多聚腺苷酸(poly1:A:μ)等;。③無機物,如明礬及氫化鋁等。

佐劑的作用機制尚不完全清楚:①它可能增加抗原的表面面積,易為巨噬細胞所吞噬;②延長抗原在體內的存留期,增加與免疫細胞接觸的機遇;③誘發抗原注射部位及其局部淋巴結的炎症反應,有利於刺激免疫細胞的增殖作用。

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