標籤:SLE自身免疫性疾病自身抗體

抗核抗體(antinuclear antibody,ANA)又稱抗核酸抗原抗體,是一組將自身真核細胞的各種成分脫氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作為靶抗原的自身抗體的總稱,能與所有動物的細胞核發生反應,主要存在於血清中,也可存在於胸水、關節滑膜液和尿液中。

1中文名稱

抗核抗體

2英文名稱

antinuclear antibody

3別名

ANA

4原理簡介

抗核抗體在多種自身免疫病中均呈不同程度的陽性率,如系統性紅斑狼瘡(SLE,95%~100%)、類風濕性關節炎(RA,10%~20%)、混合性結締組織病(MCTD,80%~100%)、乾燥綜合症(SjS,10%~40%)、全身性硬皮病(85%~90%)、狼瘡性肝炎(95%~100%)、原發性膽汁性肝硬化(95%~100%)等,但經皮質激素治療后,陽性率可降低。抗核抗體在類風濕病人中約有20%~50%IgG型ANA呈陽性,小兒類風濕ANA的陽性率約19%~35%,伴發虹膜睫狀體炎者陽性率高(50%~90%),故ANA陽性預示類風濕有發生慢性睫狀體炎的可能。已發現75%類風濕病人有多形核白細胞的特異性ANA或抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)可使白細胞核受到破壞。

5詳細內容

抗核抗體是一組對細胞核內的DNA,RNA,蛋白或這些物質的分子複合物的自身抗體。按其核內各個分子的性能不同可將各ANA區分開來,如(一)抗DNA抗體,(二)抗組蛋白抗體,(三)抗非組蛋白抗體,(四)抗核仁抗體等。每一大類又因不同抗原特性而再分為許多種類。因此ANA在廣義上是一組各有不同臨床意義的自身抗體,更確切的名稱應為抗核抗體譜。ANA 主要存在於IgG,也見於IgM、IgA,甚至LgD及LgE中。
常見的核免疫熒光杭核抗體試驗有以下幾種圖形:(1)均質型:核質染色均勻一致,這種染色型常與抗組蛋白和抗DNA抗體有關;(2)斑點型:核質染色呈斑點狀,抗可提取性核抗原(ENA)抗體常呈這種染色型;(3)周邊型:熒光染色圍繞在核膜周圍,它與抗DNA抗體有關;(4)核仁型:僅有核仁染色,具有抗4-6sRNA抗體呈現這種染色型;(5)著絲點型:在體外培養的細胞株(喉癌細胞)在核分裂相期時,可見到熒光染色的著絲點排列成特殊圖型,而在鼠肝做底物中看不到此類圖型,而被遺漏。

6抗體分類

抗核抗體的分類,由於核抗原不同,有多種不同的ANA 。
抗組蛋白抗體
組蛋白是一組鹼性蛋白質,含有稍高量的賴氨酸及精氨酸。是與DNA形成的複合物,結合成DNA一組蛋白。組蛋白抗體見於藥物誘發的SLE。國外報道,用免疫熒光三步法測23例藥物致狼瘡陽性率為96%,12例SLE中42%陽性。北京協和醫院以同樣方法檢測488例服用異煙肼,68例服用苯妥英鈉,40例服用復降片(內含肼苯噠嗪),都在服用6個月以上者和另133例服他巴唑3個月以上者,無一例查到本抗體。這種差異可能與中國服用肼苯噠嗪和普魯卡因醯胺的患者較少之故,也不能除外人種不同而造成的差異。
抗核仁抗體
抗核仁抗體是一組對核仁不同RNA成分的抗體。由於成分(4-6sRNA)不同,因此構成斑塊,斑點,均質等不同圖型。本核體在以HEP-2細胞為底物間接免疫熒光檢查為明顯。協和醫院免疫組的陽性率是PSS38.5%,SLE6.1%,RA15.3%,(陽性者都合併有指端硬化),SS8.6%,PM/DM10.0%,雷諾現象25%,其他結締組織病和正常人均陰性。抗核仁抗體不僅在PSS最多見,且滴度亦高,故它對PSS診斷有一定的幫助。
抗核抗體的檢測在自身免疫病的臨床診斷、鑒別診斷、評價療效和預后估計中具有較大的意義,因此常將抗核抗體的檢測作為自身免疫病的重要初篩試驗。

7抗體意義

陽性意義
抗核抗體譜包括抗核抗體(ANA)、抗DNA抗體、抗核內可溶性抗原抗體(ENA)。ENA又包括抗史密斯抗體(Sm)、抗核糖核蛋白體(RNP)抗體、抗乾燥綜合征A(SSA/Ro)抗體、抗乾燥綜合征B(SSB/La)抗體、抗硬皮病-70(Scl-70)抗體。臨床意義為:[1]ANA:ANA為一系列抗細胞核抗原的自身抗體的總稱。一般應用免疫熒光的方法檢測。根據核熒光的類型分為以下幾種類型:①周邊型(M 型):核周邊的熒光增強呈環狀。M型的ANA主要有抗雙鏈DNA抗體組成,故高滴度的M型ANA幾乎僅見於SLE,因此有助於SLE的診斷。②均質型(H 型):整個細胞核呈一片模糊而均勻的熒光。H型的ANA主要有抗脫氧核蛋白抗體組成。高滴度的H型ANA主要見於SLE,而低滴度H型ANA偶可見於藥物性狼瘡,JRA等其他自身免疫性疾病。③斑點型(S型):核內熒光呈顆粒狀。是有抗Sm抗體,抗SSB/La抗體、抗Scl-70抗體等多種抗體組成。因此S型ANA可見於SLE,混合性結締組織病(MCTD),硬皮病(PSS),乾燥綜合征(SS),多法性肌炎及皮肌炎(PM或DM)等自身免疫病。[2]抗DNA抗體:抗DNA抗體主要為抗雙鏈DNA(ds-DNA)抗體。抗ds-DNA抗體主要見於SLE患兒,其他疾病及正常人很少出現,是 SLE的診斷標準之一。高滴度的抗ds-DNA抗體不僅表示疾病的活動性,而且提示疾病累及腎臟的可能性。[3]ENA:①抗Sm抗體:其抗原主要為U簇小分子細胞核糖核蛋白微粒。抗Sm抗體是SLE的特異性抗體,為SLE的診斷指標之一。Sm抗體與狼瘡的腎臟和中樞神經病變有關。②抗RNP抗體:其抗原主要為U1小分子細胞核糖核蛋白粒子,主要見於混合結締組織病,患者SLE、PSS或DM的臨床表現,高滴度的RNP抗體為混合結締組織病的標誌。③抗 SSA/Ro抗體:抗SSA抗體主要參與皮膚的病理損害,引起重度過敏為特徵的急性皮膚型狼瘡的皮損,當母體血清中含有IgG類的抗SSA抗體,可引起新生兒狼瘡綜合征,出現典型的SLE皮損,該抗體還可以與胎兒的心臟的傳導系統結合,導致新生兒先天性心臟完全型傳導組滯。④抗SSB/La抗體:該抗體是公認的乾燥綜合征的標誌抗體,其他免疫性疾病如果發現抗SSB抗體陽性,患者一般有繼發性乾燥綜合征。⑤抗Scl-70抗體:其僅見於硬皮病,是硬皮病的特異性抗體。因此你還要進一步檢查查明引抗核抗體陽性的病因。

8檢測方法

由於ANA的複雜性及多樣性,故測定方法繁多。ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印跡技術等。
1.免疫熒光法檢測血清總ANA最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細胞核基質,結果比較穩定可靠,在熒光顯微鏡下見到的細胞核有熒光著色為陽性反應。如將患者血清先進行不同比例的稀釋,可以做大致的定量試驗,在1:80稀釋仍然雖陽性時,對SLE的診斷有較大的參考價值。在油鏡下觀察結果,可以將ANA陽性的熒光現象分成4種主要的熒光核型,核型的確定對臨床診斷有進一步的參考價值。①周邊型表示抗DNA抗體存在;②均質型表示有抗DNP抗體;③斑點(顆粒)型多為抗ENA抗體;④核仁型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現周邊型、勻質型或混合型,斑點型多見於混合結締組織病,而硬皮病多為核仁型;周邊型對SLE有較高的特異性。
有人用錐蟲或血鞭毛蟲(例如綠蠅短膜蟲試驗)作基質測定抗dsDNA抗體,因為這些血寄生蟲的動基體內含大量的純dsNDA,無其他抗原干擾;在陽性結果時,可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該試驗用於測定抗dsDNA抗體具有特異性強和敏感性高的優點。另外,短膜蟲對人畜無害,可以人工養殖,來源方便,值得推廣。
2.放射免疫法常用檢測抗DNA抗體,有Farr法及過濾法。①Farr法的原理為用同位素標記DNA,被標記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結合,經50%硫酸銨飽和液沉澱,然後比較沉澱物和上清液中的放射活性,從而得出DNA結合活性,一般結合率大於20%為陽性。②過濾法是在分離結合物時用纖維素酯薄膜濾器(孔徑為0.45μm)進行過濾,遊離的DNA被濾去而與抗體結合的複合物被阻留在濾膜上。
3.ELISA臨床上主要是應用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體,其重複性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。已有試劑盒供應。
4.免疫印跡(immunoblotting)先將混合抗原作凝膠電泳,分離開不同的區帶,然將這些帶轉印到硝酸纖維素膜上,最後用酸標抗體或放射性同位素標記抗體進行檢測和分析。由於該試驗不需純化的單個抗原,可在同一固相上作多項分析檢測,靈敏度高,特異性強。故已廣泛用於自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測,如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。
另外,還可用傳統的瓊脂雙向擴散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結合試驗等。
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