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暗視野顯微鏡

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暗視野顯微鏡(dark field microscope)是光學顯微鏡的一種,也叫超顯微鏡(ultramicroscope )。 暗視野顯微鏡(dark field microscope)的聚光鏡中央有當光片,使照明光線不直接進人物鏡,只允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡,因而視野的背景是黑的,物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至 4~200nm的微粒子,解析度可比普通顯微鏡高50倍。

暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡
暗視野顯微鏡(dark field microscope)是光學顯微鏡的一種,也叫超顯微鏡(ultramicroscope )。

暗視野顯微鏡的聚光鏡中央有擋光片,使照明光線不直接進人物鏡,只允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡,因而視野的背景是黑的,物體的邊緣是亮的。暗視野顯微鏡雖然不具備觀察物體內部的細微結構的功能,但可以分辨0.004μm以上的微粒的存在和運動,比普通光學顯微鏡高50倍。因而常用於觀察活細胞的結構和細胞內微粒的運動等。

1 暗視野顯微鏡 -基本原理

暗視野顯微鏡暗視野照明方式

暗視野顯微鏡的基本原理是丁達爾效應。當一束光線透過黑暗的房間,從垂直於入射光的方向可以觀察到空氣里出現的一條光亮的灰塵「通路」,這種現象即丁達爾效應。暗視野顯微鏡在普通的光學顯微鏡上換裝暗視野聚光鏡后,由於該聚光器內部拋物面結構的遮擋,照射在待檢物體表面的光線不能直接進入物鏡和目鏡,僅散射光能通過,因而視野是黑暗的。暗視野顯微鏡由於不將透明光射入直接觀察系統,無物體時,視野暗黑,不可能觀察到任何物體;當有物體時,以物體衍射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。在暗視野觀察物體,照明光大部分被折回,由於物體(標本)所在的位置結構,厚度不同,光的散射性,折光等都有很大的變化。

2 暗視野顯微鏡 -結構與改裝

暗視野顯微鏡基本結構是將普通顯微鏡光學組加上擋光片。普通顯微鏡只要聚光器是可以拆卸的,支架的口徑適於安裝暗視野聚光器,即可改裝成暗視野顯微鏡。在無暗視野聚光器時,可用厚黑紙片製作一個中央遮光板,放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上,也能得到暗視野效果。擋光片是用來擋住光源中間的光線,讓光線只能從周圍射入標本,大小約和光圈大小相同。不同倍率用不同的光圈,所以要製作不同的擋光片。

3 暗視野顯微鏡 -使用方法

暗視野顯微鏡的基本使用方法如下:
1.安裝暗視野聚光器(或用厚實的黑紙片製成遮光板,放在普通顯微鏡的聚光器下方,也能得到暗視野效果)。
2.選用強光源,一般用顯微鏡燈照明,以防止直射光線進入物鏡。
3.在聚光器和玻片之間加一滴香柏油,避免照明光線於聚光鏡上進行全反射,達不到被檢物體,而得不到暗視野照明。 4.進行中心調節,即水平移動聚光器,使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴格位於一直線上。升降聚光器,將聚光鏡的焦點(圖2中圓錐光束的頂點)對準待檢物。
5.選用與聚光器相應的物鏡,調節焦距,按普通顯微鏡的方法操作。

4 暗視野顯微鏡 -實際應用 

暗視野顯微鏡鉤端螺旋體(暗視野映光法)

臨床上,暗視野顯微鏡常用於檢查蒼白的螺旋體。這是一種病原體檢查,對早期梅毒的診斷有十分重要的意義。

暗視野顯微鏡常用來觀察未染色的透明樣品。這些樣品因為具有和周圍環境相似的折射率,不易在一般明視野之下看的清楚,於是利用暗視野提高樣品本身與背景之間的對比。這種顯微鏡能見到小至4~200nm的微粒子,只能看到物體的存在、運動和表面特徵,不能辨清物體的細微結構。

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