標籤: 暫無標籤

活體染色是利用某些無毒或毒性很小的染料來顯示細胞內某些天然結構,而不影響細胞的生命活動或產生任何物理、化學變化以致引起細胞的死亡。

1 活體染色 -基本資料 活體染色

活體染色是指一個獲得動物或植物的細胞活組織被染色。至於體外活體染色是指也獲得動物或植物分離出來的一部分細胞活一部分組織被一種活體染色劑染色而不影響細胞活組織的生命。活體染色與體外活體染色的主要區別:活體染色是在有機體內部,因此不在空氣中而是在還原的環境中進行的,至於體外活體染色是在空氣中,在氧化的環境中進行的。所以一種真正的活體染色劑就是在一種生物的活細胞的某種構造上面的染料,但對於細胞、對於組織和對於生命本身不發生任何有害的作用。活染技術可用來研究生活狀態下的細胞形態結構和生理、病理狀態。

原理:一般的生物材料不能穿透細胞膜,只有當細胞被固定后,細胞膜被破壞,染料才能進入細胞內部。但是,有一些染料(稱「活體染料」)卻能進入活細胞,它們是一些無毒或毒性很小的染色劑,能使細胞中某些特定結構著色。活體染料基本上不影響或很少影響細胞的生命活動。

活體染料多為鹼性染料,如中性紅、健那綠、次甲基藍、甲苯胺藍、亮焦油紫等,它們解離后帶正電,其中有的染料與胞內某些結構有專一性接合。例如,中性紅染液泡系,健那綠染線粒體。


實驗步驟

1、活細胞的檢測一:台盼藍排除法

取一滴細胞懸液,與一滴2%台盼藍溶液混合,放蓋玻片,靜置3分鐘,顯微鏡下觀察染色情況。活細胞不著色,死細胞呈藍色。計算活細胞的百分比。


2、活細胞的檢測二:中性紅法

1)在小離心管中,用Hanks液對1%中性紅水溶液作10倍稀釋,1500rpm離心7分鐘,取上清液置另一乾淨的離心管中作為染色液。

2)將細胞懸液與染液4:1混合,混勻后加蓋玻片靜置15-20分鐘。

3)顯微鏡觀察染色情況。死細胞不著色,活細胞可吸收中性紅溶液而呈紅色。

2 活體染色 -相關資料

細胞活體染色可增加質壁分離實驗效果:植物細胞的質壁分離與復原」這一實驗,在教科書中指出:該實驗材料是紫色的洋蔥,不需染色可直接觀察到液泡體積大小的變化。洋蔥的表皮,實際上只有外表皮呈現出紫色,但對於初學者來說極難取到只有單層細胞的觀察材料,多層細胞的材料往往相互重疊呈象,觀察效果很不理想。在實踐中我們發現洋蔥的內表皮的撕取很易獲得只具有單層細胞的薄膜材料,但內表皮卻又是無色透明的,用其直接作觀察材料,顯然效果也不理想。我們通過反覆摸索,發現對洋蔥細胞活體染色后,再取內表皮做質壁分離和復原實驗,實驗效果就好多了。具體作法如下:

用小刀在鱗片內側劃成約2cm2的小塊,將取下的小塊放入003%的中性紅色溶液中染色10~15min。取出小塊稍加沖洗后,兩手握住處理過的鱗片兩側並朝內表皮方向對摺。即可露出帶紅色的薄膜內表皮。用鑷子取小片內表皮製片觀察,會看到細胞的細胞壁染成了醒目的紅色,其他部分仍為無色。此時細胞的原生質與細胞壁的對比十分明顯,質壁分離與復原的效果也十分理想。

在操作中我們還發現也可以先單獨將內表皮染上顏色,然後放在清水中浸泡十來分鐘,可褪去細胞壁的顏色,但染成桃紅色的液泡的顏色不會褪去,再將內表皮製片做質壁分離與復原的實驗效果更為理想。

網址:http://tieba.baidu.com/f?kz=150746311

相關評論

同義詞:暫無同義詞