標籤: 暫無標籤

生物化學減色效應,在生物化學中,是指:若變性DNA復性形成雙螺旋結構后,其260nm紫外吸收會降低,這種現象叫減色效應。

1生物化學減色效應實驗

實驗部分
2.1 主要儀器和試劑 λ-17紫外——可見分光光度計(美國Pekin-Elmer公司)。核酸溶液:小牛胸腺DNA,酵母RNA(中國科學院上海生物化學研究所)操作液濃度100 mg/L;甲基紫溶液:2×10-4 mol/L水溶液;Tris-HCl緩衝溶液:pH=7.4。試驗用水均為二次蒸餾水。
2.2 實驗方法 在10 mL比色管中加入0.90 mL 2×10-4 mol/L甲基紫,適量核酸溶液和1.5 mL Tris-HCl緩衝溶液,並稀釋至刻度,然後以試劑空白作參比,測定579 nm處
減色效應

  減色效應

的吸光度值。

結果與討論

3.1 紫外——可見光譜 
甲基紫的最大吸收峰579 nm,隨著核酸的加入產生減色效應,其減色強度與核酸濃度成正比,減色效應最大是小牛胸腺DNA,酵母RNA最小。
3.2 最佳酸度的選擇 
試驗了不同介質條件下體系的減色效應影響,以1.5 mL pH 7.4 Tris-HCl緩衝溶液減色效應最強,且比較穩定。
3.3 甲基紫濃度的影響 
固定核酸濃度,試驗了不同濃度甲基紫對體系的影響,實驗結果表明2×10-4 mol/L甲基紫0.9 mL時體系減色效應最大,且與核酸濃度具有良好的線性關係。
3.4 反應時間的影響 
在室溫條件下,體系的反應速度很快,5 min之內體系吸光度即可達到最大,並且在30 min之內基本保持穩定。
3.5 離子強度的影響 
通過加入NaCl溶液來改變體系的離子強度,隨著NaCl濃度的加大,可以抑制核酸對甲基紫的減色效應,在配製溶液或緩衝溶液的選擇時應避免離子強度過大。
3.6 共存物質的干擾 
按實驗方法在一定量核酸存在下,大多數離子對核酸的測定影響不大,其測定結果的允許誤差不超過±5%時,下列離子及有關物質不干擾測定(括弧內的數字是核酸濃度的倍數),即Ca2+、Ba2+、Mg2+、Zn2+(>50),Mo(Ⅵ)、W(Ⅵ)、Fe3+、Ti(Ⅳ)、Cu2+、Co2+、Cd2+(30),Fe2+、As3+(30),烏嘌呤(5),胸腺嘧啶,嘌呤(3)對體系的測定無影響。唯有蛋白質對測定干擾較嚴重,測定前應預先除去蛋白質。
3.7 線性範圍 
實驗了不同濃度DNA,熱變性DNA,RNA線性範圍及工作曲線,不同濃度的實驗結果表明:對於小牛胸腺DNA,熱變性DNA和酵母DNA的線性範圍分別為0~5.0,0~5.0,0~10.0 mg/L。擬合的線性方程分別為A=-0.10C+0.984,A=-0.089C+0.979和A=-0.039C+0.978(A為吸光度,C為濃度)其相關係數分別為0.998,0.997和0.995。可見本方法的優點是線性範圍寬,藥品廉價易得,簡便、快速,有一定實用性。
3.8 樣品分析
採用本方法對含有20~30倍Fe3+,Cu2+、Ca2+和Zn2+的合成樣品中DNA,RNA進行了分析。對標準含量為1.50和2.00 mg/L的DNA,6次測定結果分別為1.52和2.08 mg/L,相對標準偏差分別為3.1%和2.5%;對標準含量為4.00和5.00 mg/L的RNA,6次測定結果分別為3.92和4.91 mg/L,相對標準偏差為1.7%和2.8%。

2分析化學減色效應

在分析化學中,是指:化合物結構改變或其他原因,使吸收強度減弱的效應,也稱為淡色效應
在分子光譜中有機化合物的特定發色團吸收峰摩爾吸光係數降低;而且其吸收峰位置產生向藍位移現象,稱為減色效應。它是由於化合物分子結構發生變化產生向藍基團所引起的這種現象。如在相等物質的量的核苷酸溶液中,遊離核苷酸在260nm處的吸光率較單鏈DNA高,而單鏈DNA的吸光率又比雙鏈DNA高的現象。這是由於多核苷酸鏈結構中鹼基自由旋轉受阻所致。通過在波長260nm處記錄溶液的光密度,能夠追蹤DNA的變性作用。

3光學減色效應

光的減色效應是指從白光或複合光中減去某種色光,而得到另一種色光的效應。
光的減色效應概括起來有以下規律:
1、原色(紅、綠、藍)濾光器,只允許和本濾色鏡顏色相同的色光透過,吸收其它色光。
白光是由等量的紅光、綠光、藍光混合而成的。當白光通過紅濾鏡時,它只允許本色光透過,吸收綠光和藍光。綠濾鏡允許透過綠光,吸收紅光和藍光;藍濾鏡允許透過藍光,吸收紅光和綠光。
2、補色(黃、品紅、青)濾光器,也稱中間色濾光器,它允許與本濾色鏡顏色相同的色光透過,同時還允許形成這一補色的其它兩種原色光透過,吸收其它色光。
補色濾鏡中的黃濾鏡,允許黃光和紅光、綠光透過,吸收與黃光互為補色的藍光;品紅濾鏡可以透過品紅光和紅光、藍光,吸收綠光;青濾鏡可能透過青光和綠光、藍光,吸收紅光。
3、兩種補色濾鏡疊加使用,只允許形成這兩補色所共有的一種原色光透過,吸收其它色光。
4、兩種原色濾鏡疊加,各種色光均被吸收,或根據某一種濾色鏡的濃淡程度,透過部分色光。
5、三補色濾鏡疊加,各種色光相繼被吸收,最終都不能透過,而呈現出黑色效果。如果三補色顏色均較淡,疊加后三濾鏡本身呈現中性灰色,這時白光還能透過一部分,但強度明顯較弱。
從上述濾光器的透光規律可以看出,濾光器不論是裝在照相機、攝影機、攝像機的鏡頭前端或後端,它都會根據濾光器的顏色、深淺程度,對不同波長的光波進行吸收與透過。當濾色鏡運用於黑白攝影中,由於濾光器的顏色不同,則會改變景物在畫面中的影調、反差。如果加用的濾色鏡與景物顏色相一致,那麼,拍攝后畫面中該景物的顏色就會形成較淺或明亮的影調;如果景物中的顏色與濾色鏡不一致,則該景物的顏色在拍攝后的畫面中影調變暗。當有色濾光器運用於彩色攝影攝像中,畫面效果會根據所加濾色鏡的顏色而形成與濾鏡顏色相一致的色調。  
上一篇[ROR]    下一篇 [協定存款]

相關評論

同義詞:暫無同義詞