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無菌操作,是指用於防止微生物進入人體組織或其它無菌範圍的操作技術,如外科手術需防止細菌進入傷口,在各種生物實驗中,為了防止微生物地生長和繁殖影響實驗的進行,也要在無菌的環境下進行。

1 無菌操作 -無菌操作

2 無菌操作 -正文

  在操作過程中人為地排除一切微生物或一切不需要的微生物。它是微生物學的基本技術。要點是:①殺死規定作業系統(如試管、三角瓶和培養皿)中的一切微生物,使作業系統變成無菌;②在作業系統與外界的聯繫之間隔絕一切微生物穿過(如用火焰封閉三角瓶和試管等的開口,用棉花過濾空氣、用濾器過濾水等);③在無菌室、超凈操作台或空氣流動較小的清潔環境中,進行接種或其他不可避免的敞開作業,防止不需要的微生物侵入作業系統。

3 無菌操作 -菌操作的要求

  1操作前將界面上的細菌和病毒等微生物殺滅

   2操作過程中是界面與外界隔離,避免微生物的侵入

4 無菌操作 -無菌操作原則

   一、在執行無菌操作時,必須明確物品的無菌區和非無菌區。

   二、執行無菌操作前,先戴帽子、口罩、洗手,並將手擦乾,注意空氣和環境清潔。

   三、夾取無菌物品,必須使用無菌持物鉗。

   四、進行無菌操作時,凡未經消毒的手、臂、均不可直接接觸無菌物品或超過無菌區取物。

   五、無菌物品必須保存在無菌包或滅菌容器內,不可暴露在空氣中過久。無菌物與非無菌物應分別放置。無菌包一經打開即不能視為絕對無菌,應儘早使用。凡已取出的無菌物品雖未使用也不可再放回無菌容器內。

   六、無菌包應按消毒日期順序放置在固定的櫃櫥內,並保持清潔乾燥,與非滅菌包分開放置,並經常檢查無菌包或容器是否過期,其中用物是否適量。

   七、無菌鹽水及酒精、新潔爾滅棉球罐每周消毒一次,容器內敷料如干棉球、紗布塊等,不可裝得過滿,以免取用時碰在容器外面被污染。

5 無菌操作 -無菌操作技術及注意事項

   1、玻璃器皿的消毒和清潔

   ⑴新購玻璃器皿的處理新購玻璃器皿應用熱肥皂水洗刷,流水沖洗,再用1%~2%鹽酸溶液浸泡,以除去遊離鹼,再用水沖洗。對容量較大的器皿如試劑瓶、燒瓶或量具等,經清水洗凈后應注入濃鹽酸少許,慢慢轉動,使鹽酸布滿容器內壁數分鐘后傾出鹽酸,再用水沖洗。

   ⑵污染玻璃器皿的處理

   ①一般試管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡,再煮沸30分鐘,或在3%~5%漂白粉澄清液內4小時,有的亦可用肥皂或合成洗滌劑洗刷使盡量產生泡沫,然後用清水沖洗至無肥皂為止。最後用少量蒸餾水沖洗。

   ②細菌培養用的試管和培養皿可先行集中,用1kg/cm2高壓滅菌15~30分鐘,再用熱水洗滌后,用肥皂洗刷,流水沖洗。

   ③吸管使用后應集中於3%煤酚皂溶液中浸泡24小時,逐支用流水反覆沖洗,再用蒸餾水沖洗。

   ④油蠟沾污的器皿,應單獨滅菌洗滌,先將沾有油污的物質棄去,倒置於吸水紙上,100℃烘乾半小時,再用鹼水煮沸,肥皂洗滌,流水沖洗。必要時可用二甲苯或汽油去油污。

        ⑤染料沾污的器皿,可先用水沖洗,後用清潔或稀鹽酸洗脫染料,再用清水沖洗。一般染色劑呈鹼性,所以不宜用肥皂的鹼水洗滌。

   ⑥玻片可置於3%煤酚皂溶液中浸泡,取出后流水沖洗,再用肥皂或弱鹼性煮沸,自然冷卻后,流水沖洗。被結核桿菌污染或不易洗凈的玻片,可置於清潔液內浸泡后再沖洗。      2、無菌器材和液體的準備將玻璃器具中的培養皿、培養瓶、試管、吸管等按上述方法洗凈烘乾后,用一潔凈紙包好瓶口並把吸管尾端塞上棉花,裝入乾淨的鋁盒或鐵盒中,於120℃的乾燥箱中乾燥滅菌2小時,取出備用。對於手術器械、瓶塞、工作服以及新配製的PBS洗液,則採用高壓蒸氣滅菌法,即在15磅的條件下,加熱20分鐘。而對於MEM培養液、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負壓抽濾后使用。

   3、無菌操作過程在無菌操作過程中,最重要的是要保持工作區的無菌、清潔。因此,在操作前20~30分鐘要先啟動超凈台和紫外燈,並認真洗手和消毒。在操作時,嚴禁喧嘩,嚴禁用手直接拿無菌物品,如瓶塞等,而必須用消毒的止血鉗、鑷子等。培養瓶應在超凈台內操作,並且在開啟和加蓋瓶塞時需反覆用酒精燈燒。對於吸管應先用手拿后1/3處,戴上膠皮乳頭,並用酒精燈燒烤之後再吸液體。

   4、常用清潔液的配製法

       ⑴重鉻酸鉀清潔液:可根據不同需要,選用下列的任何一種濃度。先將重鉻酸鉀溶於水中,再慢慢加入濃硫酸。注意,此時可產生高熱,應防止容器破裂。重鉻酸鉀清潔液除污力強,腐蝕性大,應避免接觸皮膚和衣服。為防止吸收空氣的水分而變質,此液應貯存於帶蓋的容器中。如清潔效力較差,可再加入少量重鉻酸鉀及濃硫酸,還可繼續使用。直到液體變藍綠色,即不能再用。配製重鉻酸鉀清潔液時,宜用耐高溫的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用玻璃器皿時,應特別注意防止產生高熱而破裂,切忌用量筒來配製。

   ⑵磷酸三鈉將其配成5%~10%水溶液,可用於洗滌玻璃器皿上的油污,但經常使用腐蝕玻璃,使器皿表面模糊、毛糙。

   ⑶硝酸清潔液將其配成50%水溶液,可用於清潔微量滴定筒。

        ⑷乙二胺四乙酸二鈉(EDTA鈉鹽)將其配成5%~10%水溶液,可洗脫粘附於玻璃器皿內壁的白色沉澱物。

        ⑸尿素溶液尿素是溶解蛋白質的良好溶劑,適用於洗滌粘附有血液血清等蛋白質的吸管、試管等。

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