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熒光密螺旋體抗體吸收試驗

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熒光密螺旋體抗體吸收實驗用Nichols株梅毒螺旋體抗原懸液在玻片上塗成菌膜,吸附待檢血清中的lgG抗體,再用熒光素標記的羊抗人lgG抗體,顯示待檢血清中含有的抗螺旋體抗體。因待檢血清預先經吸附劑去除了非特異性抗體,故特異性較高。一般用於篩選實驗陽性標本的確診實驗。
1、操作步驟
(1)抗原片製備:Nichols株梅毒螺旋體(每高倍視野20條)抗原懸液,在玻片上塗數個直徑為5mm的菌膜,干后以甲醇固定。
(2)待檢血清預處理:待檢血清先經56%30分鐘滅活,取50ul血清與200ul吸附劑(Reiter株非致病密螺旋體)混勻,37℃作用30分鐘,以充分吸除非特異性抗體。
(2)夾心法熒光顯色:吸附后的待檢血清用磷酸鹽緩衝液(PBS)作1;20—1:320的倍比稀釋,將稀釋后的血清分別滴加於抗原菌膜上,置濕盒內37℃孵育30分鐘,然後用PBS洗片,並將玻片在PBS中浸洗,換液3次,每次5分鐘,吹乾。各抗原反應片上滴加工作濃度熒光素標記的羊抗人lgG抗體,置濕盒37℃孵育30分鐘,再用PBS按前法洗片,干後用甘油緩衝液封片。
(3)熒光顯微鏡觀察:每次實驗設陽性、陰性、非特異性血清對照。陰性標準血清無熒光菌體或偶爾見熒光菌體出現:陽性對照可見多數(高倍視野15條)熒光菌體出現。並以此為參照作出待檢標本的判定。
結果判定:陽性結果參照陽性標準血清的熒光強度判定:半數高倍視野(10條左右)出現熒光,則為(+ +),多半視野呈熒光(15條左右 )則為(+ + +),全部(約20條)出現強熒光則為(+ + + +)。「可疑」結果參照非特異性血清的熒光強度判定為(+ +)或(+),陰性結果參照陰性對照血清判定為(-)或(+)。
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