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瑞氏染液,是由酸性染料伊紅和鹼性染料美藍組成的複合染料,溶於甲醇后解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。

1 瑞氏染液 -相關條目

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2 瑞氏染液 -醫學術語及英文拼寫

是由酸性染料伊紅和鹼性染料美藍組成的複合染料,溶於甲醇

后解離為帶正電的美藍和帶負電的伊紅離子。

英文拼寫     Wright's stain

3 瑞氏染液 -使用方法

瑞氏(Wright's staim;美藍-伊紅Y)染色:

1.瑞氏染料是由鹼性染料美藍(Methvlem blue)和酸性染料黃色伊紅(Eostm Y)合稱伊紅美藍染料即瑞氏(美藍-伊紅Y)染料。

2.用甲醇作瑞氏染料溶劑,即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑,有兩種作用:

(1)甲醇使瑞氏染料中美藍(M)與伊紅(E)在溶液中離解,可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。

          甲 醇
   ME(瑞氏染料)----→M+ + E-

  在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青,美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色,但不能使胞漿染為藍色,多餘美藍就可以使胞漿染成藍色,染色主要是化學作用,是離子彼此結合的反應。

(2)甲醇具有強大的脫水力,可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積,提高細胞對染料吸收作用,同時由於甲醇吸附染色液中的水,使染色液升溫,加速染色反應。

3.瑞氏染液配製:

(1) 瑞氏染液配製:
   瑞氏染料 830gm或1g
   甲醇(AR) 500ml或600ml

○先稱乾燥(事先放入溫箱乾燥過夜)瑞氏染料放置乳缽內,用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯「一面鏡」光澤,而無染料粉粒沉著。
○再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重複數次,至乳缽內染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口。
○存室溫暗處,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲存3個月以上為佳。

(2) 緩衝液:

●緩衝液作用:
○染色對氫離子濃度是十分敏感的,據觀察pH值的改變,可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。
○緩衝液須保持一定的pH使染色穩定,PBS的pH 一般在6.4~6.8,
○偏鹼性染料可與緩衝液中酸基起中和作用,偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基起中和作用,使pH恆定。

●緩衝液配製(pH6.4~6.8,弱酸性):

   配方1 :         配方2:
   1% KH2PO4 30ml      M/15 KH2PO4 73.5 ml
   1% Na2HPO4 20ml      M/15 Na2HPO4 26.5ml
   H2O(新鮮)         加至1000ml

  置室溫黑暗處,瓶口密封,防止黴菌污染,如有污染則應報廢。

姬姆薩(Giemsa's stain;天青-伊紅)染色

1.姬姆薩染料是伊紅(AzurII Eqsin)和天青(藍)2號合成的。

2.姬姆薩染料( Giemsa, 天青-伊紅)染液配製:

  姬姆薩染料(粉末)     0.5g或7.5g
  甲醇(AR)         33ml 或500ml
  甘油(AR)         33ml或 500ml

●先將姬姆薩染料放入乳缽中,逐漸倒甘油研磨溶於甘油中,置於56℃水溫箱內,90~120分鐘,然後加入甲醇,搖勻後放置數天,過濾后或不過濾即可使用。此染液放置室溫陰暗處,時間越長越好。

●使用染液可臨時配置):姬姆薩染液1ml,加DDH2O10ml混勻。即可使用。

3.染色步驟:

(1)先用甲醇固定2~3分鐘。
(2)將血或骨髓塗片放置姬姆薩使用液15~30分鐘。
(3)塗片用自來水沖洗,在室溫中乾燥待查。

瑞氏或姬姆薩染色液鑒定:剛配好或放置一個月以上的染液可進行下列鑒定:

1.取1滴染液於乳白玻板上,自行迅速擴散開,其顏色變紫紅色,且有偽足形成。
2.取1滴染液加1滴緩衝液,染液由深藍色立即變為紫紅色。
3.取血片或骨髓片進行試染檢查,觀察染色后各類細胞的胞核、胞漿及顆粒著色情況,pH是否合適及染色合適時間。如有上述變化,表明染液合格,可供使用。

瑞氏染色(Wright's)-姬姆薩(Giemsa's)混合染色:

●瑞氏染色的染料配方濃度對細胞核著色程度適中,細胞核結構和色澤清晰艷麗,對核結構的識別較佳,但對胞漿著色偏酸,色澤偏紅,對細胞漿內顆粒特別是嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差。

●姬姆薩染色對胞漿著色能較好的顯示胞漿的嗜鹼性程度,特別對嗜天青、嗜酸性、嗜鹼性顆粒著色較清晰, 色澤純正,而對胞核著色偏深,核結構顯示較差。

●故採用以瑞氏染液為主,姬姆薩染液為輔的混合染色。

染色步驟:
1. 先用瑞氏染液將塗膜面充分覆蓋;
2. 稍等片刻再加姬姆薩染液2-3滴加減(根據塗片上細胞多少及增升程度酌情而定);
3. 稍等1-2分鐘后,再加磷酸鹽緩衝液,加時應緩慢地一滴一滴加在塗片膜上,直至膜面上染色液形成表面張力而終止染色液加入;
4. 染色30-40分鐘;
5. 分色:用自來水緩緩衝洗至少3分鐘以上,待干,勿用濾紙吸干,以免濾紙纖維污染塗片。

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