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第四十六章滅菌法

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滅菌法是指殺死或除去所有微生物的方法,是滅菌藥劑生產的主要過程,對於注射劑尤為重要。微生物包括細菌、真菌、病毒等。

一、概述

  滅菌法是指殺死或除去所有微生物的方法,是滅菌藥劑生產的主要過程,對於注射劑尤為重要。微生物包括細菌、真菌、病毒等,凡有生命的地方都有微生物存在,微生物繁殖很快。細菌的芽胞具有較強的的抗熱力,不易殺死,因此滅菌效果,應以殺死芽胞為標準。在藥劑中選擇滅菌方法,與微生物學上的要求不盡相同,不但要達到滅菌的目的,而且要保證藥物的穩定性。

  二、F與Fo值在滅菌中的意義與作用

   近年來對滅菌過程無菌檢驗中存在的問題引起人們的注意。一方面滅菌溫度多系測量滅菌器內的溫度不是滅菌物體內的溫度,同時無菌檢驗方法也在局限性。在檢品存在微量的微生物時,往往難以用現行的無菌檢驗法檢出。因此,人們對認識到對滅菌方法的可靠性進行驗證是很必要的。F(或F)值可作用驗證滅菌可靠性的參數。

   (一)微生物致死間曲線與D值 人們對微生物死亡的動力學研究表明,其死亡速度屬一級過程,在一定溫度下符合下述方程(1-1式):

 因此,D也可定義為降低微生物一個十位數()或一個對數值(如log100降低到log10)所需的時間,如圖46-1所示。D值因微生物的種類、環境、滅菌溫度不同而各異(表46-1)。

   (二)Z值一旦在不同溫度下對特定的微生物的在特定介質或環境中求得D值后,就可用logD值對溫度作圖,在一定溫度範圍內,logD與T呈直線關係,直線的斜率=logD2-logD1/T2-T1。

   由於此斜率為負值,為避免引入負數,而提出Z值的概念,Z=T-T1/logD2-logD1,故定義Z值為降低一個logD值需的溫度數,如圖46-2的單位為度,也可以認為Z值是降低微生物數90%所需要的溫度數。表46-2是一些藥物溶液的Z值

   (三)F值與Fo值

   1.F值F值的數學表達

   2.Fo值為一定滅菌溫度(T)Z值為121℃,並假設特別耐濕熱的微生物指示劑(嗜熱脂肪芽胞桿菌)的Z值為10℃,則

  同樣,Nt為滅菌后希望達到微生物殘存數,一般取10-6如將含有200個嗜熱脂肪芽胞桿菌的5%葡萄糖水溶液以121℃熱壓滅菌時殺死容器中全部微生物所需要的時間。

   Fo值的計算對於驗證滅菌效果極為有用,當產品以121℃濕熱滅菌時,滅菌器內的溫度雖能迅速升到121℃,而被菌物品內部則不然,通過由於包裝材料性能及其他因素影響而使。升溫度各異,而Fo將隨著產品溫度(T)變化而呈指數的變化。故溫度即使很小的差別(如0.1-1),將對Fo值產生顯著的影響。同時要求測定滅菌物品內的實際溫度,故用Fo來監測難滅菌效果肯有重要的意義。由於Fo是將不同滅菌溫度折算到相當於121℃濕熱滅菌時的效力,故Fo值可作為滅菌過程的比較參數。

  為了使Fo測定準確,先應選擇靈敏度高,重現性好,精密度為0.1的熱電偶,並對熱電偶進行校驗。滅菌時應將熱電偶的探針置於被測物的內部,經滅菌器通向櫃外的濕度記錄儀,有些滅菌記錄儀(digistrip recolder)附有Fo計算器,在滅菌過程中和滅菌后,自動顯示Fo值。

  另外,還應考慮一些其他因素對Fo值的影響,有人對溶液粘度,容器充填量及容器在滅菌器內的數量與排布進行了研究。結果發現對Fo均有影響,而以後者影響最大。故要注意滅菌器內各層、四角、中間位置熱分佈是否均勻,並進行實際測定,作出合理排布,以便測得Fo值更可靠。

  為了確保滅菌效果,還應注意兩個問題,根據Fo=D121×(logNo-logNt),若N越大,即被滅菌物中微生物越多,則滅菌時間越長,故生產過程中應盡量減少微生物的污染,應採取各種措施使每個容器的含菌數控制在10以下(即(log10≤1)。其次計算Fo時,應適當考慮增加安全因素,一般增加5%,如規定Fo為8分,則實際操作應控制Fo12分為好。

  三、物理滅菌法

  (一)乾熱滅菌法 一般認為繁殖型細胞在100℃以上乾熱1小時即被殺死。耐熱性細菌芽胞在120℃以下長是時間加熱也不死亡,介140℃前後則殺菌效率急劇增長。所以,關於乾熱滅菌條件,有的藥典規定為180℃1小時以上,有的藥典規定為160-170℃2-4小時,此僅是大至的標準而已,必須通過實驗,在保證滅菌完全同時對來菌物品無損害的前提下,制訂該物品的乾熱來菌條件。時間必須由滅菌物品全部達到特定溫度的計算。此法適用於耐高溫的玻璃製品、金屬製品以及不允許濕氣透的油脂類和耐高溫的粉末化學藥品等。熱原經250℃30分鐘,或200℃以上高溫至少45分鐘,可遭破壞。消毀大腸桿菌內毒素,250℃時F值為750分,210℃時F值為1950分。本法缺點是穿透力弱,溫度不易均勻,而且由於滅菌溫度過高,不適用橡膠、塑料及大部分藥品。

  (二)濕熱滅菌法 濕熱滅菌法,由於蒸氣比熱大,穿透力強,容易使蛋白變性,同時還有作用可靠,操作簡便等優點,所以是製劑生產中應用最廣泛的一種滅菌方法,本法包括熱壓滅菌法,流通蒸氣滅菌法和低溫間歇滅菌等方法。根據藥品性質進行選用。

  1.熱壓滅菌法 本法一般公認為最可靠的濕熱滅菌法。應用大於常壓的水蒸氣如1kg/cm2熱壓蒸氣以15-20分鐘,能殺滅所有細菌增殖體和芽胞。熱壓滅菌所需的溫度及與溫度相當的壓力及時間如下115.5℃1.7氣壓(表壓力0.71kg/cm2)30分鐘;121.5℃2.0氣壓(表壓力11kg/cm2)20分鐘;126.5℃2.4氣壓(表壓力1.41kg/cm2)15分鐘。濕熱滅菌一般要求Fo=1-12分。

  熱壓滅菌用的滅菌器種類很多,但其基本結構大同不異。熱壓滅菌器密閉耐壓,有排氣口安全閥,壓力表和溫度計等部件。有的通蒸氣加熱,有的用煤氣、電熱或木炭等加熱。常用的有手提式熱壓滅茵器等。

  卧式熱壓滅菌櫃,是一種大型滅菌器,全部用堅固的合金製成,帶有夾套的滅菌櫃內備有帶軌道的格車,分為若干格。滅菌櫃頂部裝有壓力表兩隻,一隻指示蒸氣夾套內的壓力,另一隻指示櫃內室的壓力。兩壓力表的中間為溫度表,滅菌櫃底部裝有排氣口,在排氣管上裝有溫度探頭,以導線與溫度相聯。國內現已經生產一種有冷卻水噴淋裝置,滅菌溫度與時間採用程序控制的新型熱壓滅菌器。

  熱壓滅菌器使用時應注意的問題:

  (1)滅菌器的構造、被來菌物體積、數量、排布均對滅菌的濕度有一定影響,故應先進行滅菌條件實驗,確保滅菌效果。

  (2)必須將滅菌器內的空氣排出。如果滅菌器內的空氣存在,則壓力表上所表示的壓力是器內蒸氣和空氣二者的總壓而非單純的蒸氣壓力。結果壓力雖然到達預定的水平,但溫度達不到。若表指示一致。則有可能空氣沒有排盡,也可能壓力表失靈,也可能不是飽和蒸氣,應找出原因,加以解決。由於水蒸氣被空氣稀釋,妨礙了水蒸氣與滅菌物品的充分接觸,而降低了水蒸氣的滅菌效果。附有真空裝置的熱壓滅菌器,在通入蒸氣前將順內空氣抽出,可加快預熱過程,縮短滅菌時間。減壓還可有效地將多孔性物質中空氣驅除,有利於水蒸氣的穿透,同時滅菌器內溫度均勻。

  (3)滅菌時間必須由全部藥液溫度直正達到所要求的溫度時算起,在開始升溫時,要求一定的預熱時間,例如250-500ml輸液瓶,預熱時間為15-30分鐘。一般滅菌器上,均裝有壓力表和溫度計,但通常是測定滅菌器內的溫度,百不是被滅菌物內的溫度,因此最限能設計直接測定被滅菌物內溫度的裝置。同時為了確保滅菌溫度,在生產上常使用溫度批示劑例如利用某些熔點正好是滅菌所需溫度的化學藥品作指示,以判斷滅菌濕度是否達到。方法是將少量的藥物封裝於安瓿內,與滅菌物一起放入滅菌器的上下部位滅菌,滅菌后觀察藥品是否熔化。常用化學藥品指示劑有升華硫(115℃)、安替匹林(110-120℃)、碘仿(115℃)、氯基比林(107-109℃)、苯甲酸(121℃)等,並可加著色劑如亞甲藍、甲紫等以便於觀察。但此類指示劑並洋能表明保持該濕度的確切時間。將耐熱的芽胞封裝於安瓿內浸透於干紙條中,製成生物性指示劑,廣泛地地試驗滅菌設備及方法。但用於藥劑的常規生產中,應使用非致病性、有抵抗力、不產生熱原的菌種,如B.Stearothermophilus此外,國內現已採用滅菌溫度和時間自動控制記錄的裝置。

  (4)滅菌完畢后,停止加熱,一般必須使壓力表所指示的壓力逐漸下降到零,才能放出鍋內蒸氣,使鍋內壓力與大氣壓相等后,稍稍打開滅菌鍋待10-15分鐘,再全部打開。這樣可避免內外壓力差太大而使物品衝出鍋外和使玻璃瓶炸裂。這點必須注意,以免發生工傷事故。為了縮短滅菌周期,也有對滅菌器內盛有溶液的容器噴霧水冷卻,以加速冷卻。實驗表明對於經過0.70熱壓滅菌的200個/升的瓶子,用水溫度18℃霧滴大小為80進行噴霧時,冷卻效果最大,過冷粗的噴霧將引起瓶子的爆破,或用逐漸降溫的噴霧水冷卻。對於滅菌后要求乾燥但又不易破損的物料,滅菌后立即放出滅菌器內的蒸氣,以利乾燥。

  2.流通蒸氣滅菌和煮沸滅菌法 流通蒸氣滅菌是不密閉的容器內,用蒸氣滅菌。壓力與大氣壓相等。即100℃的蒸氣滅菌。目前中國藥廠生產注射劑,特別是1-2的注射劑及不耐高熱的品種,可考慮採用這種滅菌法。煮沸滅菌法就是把安瓿或其他物品放入水中煮沸滅菌。流通氣滅菌與煮沸滅菌,一般是100℃30分鐘或60分鐘。此法不能保證殺滅所有的芽胞,例如破傷風等厭氣性菌的芽胞,故製備過程中要儘可能避免污染,這點必須充分注意。

  3.低溫間歇滅菌法 此法是將待滅菌的製劑或藥品,用60-80℃加或孵卵箱中放置24小時,讓其中的芽胞發育成為繁殖體,再二次加熱將其消滅為止。加熱和放置需連續操作三次以上,至全部芽胞消滅為止。此法適用於必須用熱法滅菌但又不耐較高溫度的製劑或藥品。本法的缺點,不僅需要時間長,並且消滅芽胞的效果常不夠完全,應用本法滅菌的製劑或藥品,除本身具有抑制力者外,須加適量抑菌劑,以增加滅菌效力

  4.影響濕熱滅菌的因素

  (1)微生物的種類和數量:各細菌對熱的抵抗力相差很大,處於不同發育階段,所需滅菌的濕度與時間也不相同,繁殖期的微生物對高溫比衰老時期的抵抗力小得多。前面已經指出,每個容器的細菌數,控制在10個以內為宜。最初菌數愈少,達到滅菌時間愈短。同時,最初菌數增多也增加了耐熱個體出現的幾率。即使細菌全部殺滅,而注射液中細菌體過多,亦會引起臨床上的不良反應,所以整個性產過過程應儘可能避免微生物污染,儘可能縮短生產過程,并力求在灌封后立即菌。

  (2)注射液的性質:注射液若含有營養物質,如糖類,蛋白質等,對微生物可能有一種保護作用,能增強其抗熱性。此外,藥液pH對細菌的活性也有影響。一般微生物在中性液中耐熱性最大,在鹼性溶液中次之;酸性不利於微生物的發育。所以,一般在生物鹼鹽類的注射液,因ph 較低,用流通蒸氣滅菌即可。加有適當抑菌劑時,藥液經100℃30分鐘加熱,可殺死抵力強芽胞。有些藥典採用此種滅菌方法所用的抑菌劑為甲酚(0.1-0.3%)、氯甲酚(0.05%-0.1%)、苯酚(0.1%-0.5%)、三氯叔丁醇(0.2%-0.5%)、硝酸苯汞或醋酸苯汞(0.001%-0.002%)。

  (3)藥物的穩定性:

  溫度增高,化學反應速度增加:時間愈長,起反應的物質愈多。因此,不能只看到滅菌殺死細菌的一面,也要看到保證藥物有效性的一面。為此在能達到滅菌的前提下,可適當降低濕度或縮短時間。實踐證明在力求避免微生物污染和嚴格質量控制的條件下,維生素C注射液用流通蒸氣15分鐘滅菌,氯化鈉注射注用115℃30分鐘是可行的。

  (三)紫外線滅菌法 一般用於滅菌的紫外線波長是200-300nm,滅菌力最強的是波長為254nm4的紫外線。紫外線進行直線傳播,其強度與距離平方成比例地減弱,並可被不同的表面反射。其穿透作用微弱,但較易穿透清潔空氣及純凈的水,其中懸浮物或水中鹽類增多時,則穿透程度顯著下降。所以紫外線廣泛作空氣滅菌和表面滅菌之用。一般在6-15m3的空間可裝置30瓦(或36-48)紫外線燈一隻,燈距離地面以2.5m到3m為宜。濕度過大可降低滅菌效果,相對濕度以45%-60%比較適宜。濕度宜於10-55℃範圍。紫外線燈管秘須保證無塵油垢,否則輻射強度將大力為降低。普通玻璃可吸收紫外線。因此安瓿中藥物不能用此法滅菌。

   紫外線的殺菌效率,還取決於微生物的敏感性。如於一平面上輻射強度為通常應用的最小強度2mw/cm2(30瓦紫外線燈於距1米處強度為85mw/cm2)時殺死枯草桿菌芽胞需1100秒,而對溶血性鏈球菌,則僅需275秒。可粗略認為在紫外線燈下直接暴露,一般繁殖型微生物約3-5分鐘,芽胞約10分鐘即可死亡。唯紫外線對酵母特別是黴菌殺菌力較弱。紫外線對人體如照射過久,能產生結合膜炎及皮膚燒灼等現象。一般均在操作前啟紫外線燈約半小時至一小時,然後進行操作。各種規格的紫外線燈,皆規定了有效使用時即,一般為3,000小時。故每次使用應登記開啟時間,並定期進行來菌效果的檢查,也可用具有對254nm靈敏的照度計,來測定其輻射強度。

   (四)過濾除菌法 過濾除菌法,是使藥物溶液通過無菌的特定濾器,除去活的或死的微生物而得到不含微生物的濾液。適於很不耐熱的藥液的滅菌。供來菌用的濾器。要球能有效地從溶液中除凈微生物,溶液順暢地由濾器通過,濾液中不落入任何所不需要的物質,濾器容易清洗,操作簡便。

   繁殖型細菌很少有小於1μm者,芽胞大小為0.5μm或更小些,所以,對於以過篩作用濾過的濾器,例如纖維素酯膜濾器。其孔徑大秘須小到足以阻止細胞和芽進入濾孔之內,大約為0.2μm。靠阻留於孔道之內或靜電作用的濾器,孔徑可稍大於所要濾除的顆粒,但如壓力過大或波動,顆粒有被擠過的可能。濾孔徑要進行檢查,最常用測定孔徑的方法,是用大小為0.7μm左右的靈菌(Bprodigiosus)混懸液濾過,濾液通過培養試驗,觀察有無靈菌濾過。

  近年來廣泛採用微孔薄膜作滅菌濾器,膜濾器的性能詳見注射劑一章濾器的種類與選擇項下,作滅菌過濾一般選用孔徑0.22μm的濾膜。G6號垂熔玻璃漏斗,其濾孔直徑在2μm以下,可以除去細菌,對藥物不吸附,也不影響藥液的pH,常滅菌濾器。此外孔徑0.8-1.8μm的石棉板濾器孔徑1.5-1.7μm的白陶土濾柱,也可作濾過細菌用,但由於它們存在一些缺點,所以實際使用不多。

  (五)輻射滅菌法 輻射滅菌是應用γ射線殺菌的方法。Γ射線通常可由放射性同位素如Co60產生。輻射滅菌的特點是可不升高的產品的溫度,特點用於某些不耐熱的滅菌,穿透性強,γ射線適用於較厚樣品的滅菌,現已成功地應用於某些物質如維生素類、抗菌素、激素、肝素、羊腸線、醫療器械等物質的滅菌。包裝的產品也可滅菌而大大減少了污染的機會。滅菌劑量一般用2.5兆拉得(Megarad),此法,已為《英國藥典》(1969)日本藥典Ⅸ所收載。

  輻射滅菌,設備費用高,某些藥品經輻射滅菌后,有可能效力降低,產生毒性物質或發熱性物質,且溶液不如固體穩定,同時要注意全防護問題。

  (六)微波滅菌法、高速風滅菌法 通常所謂微波,是指頻率在300兆赫到300千兆赫之間的電磁波。水可強烈地吸收微波,使極性分子轉動,由於分子間的摩擦而生熱。熱是在被加熱的物質內產生的,所以加熱很均勻,並且升溫迅速。同時,由於微波可穿透介質較深,所以在一般情況下,可以作到表裡一致地均勻加熱。微波所以用於水性注射的滅菌,主要是由於其產生熱效應的緣故。

  微波滅菌法含菌量高達350萬個大腸桿菌的生理鹽水混懸液,密封在1-2ml的安瓿中,經3-5千瓦功率,2450兆赫的微波作用15秒鐘以上,安瓿溫度接近110℃左右時,可將細胞細菌全部殺滅。金黃色葡萄球菌與此結果近似,枯草桿菌芽胞,含量為6萬-8萬個時,液溫必須達到140℃,保持20秒鐘以上。才能徹底殺滅,含2,000-3,000個青菌胞子的生理鹽水混懸液,在3-4千瓦微波功率作用下,液溫達到120℃以上,經20-25秒鐘,即徹底殺滅。經過微波滅菌后的安痛定、維生素、維生素C、速尿、慶大黴素、卡那黴素注射液。除維生素C的溶液色澤有部分變黃外,其他五種的色澤、pH和主要成份含量都無明顯變化。宇野等還比較了微波滅菌與高蒸氣滅菌對17種化學藥物穩定的影響,認為對高壓蒸氣滅菌穩定的藥物,使用微波滅菌時無變化,而對高壓蒸氣滅菌不穩定的藥物如維生素C,阿司匹林等用微波滅菌,則比較穩定,其分解程度降低。此法由於存在破損率高,滅菌不完全及勞動保護等問題,還有待進一步研究。

  高速風滅菌法,應用的風速為30-80m/秒,風溫度高為190℃,由於降低了安瓿周圍的滯流層的厚度,使安瓿內液體迅速升溫。2ml的安瓿注射液應用此法,能於3分外的短時間內升高至140℃,對於耐熱性高的嗜熱脂肪芽胞桿菌,液溫度達到130℃以上,就呈現顯著滅菌效果。與熱壓蒸氣滅菌法比較,不但具不同等以上的滅菌效果,並使注射液變質較少。因此,作者認為高速熱風菌法,對於小容量安瓿注射液的滅菌極為不利。

  此外還有超音波滅菌法,僅用於疫苗製品。

  四、化學滅菌法

  本法是指用化學藥品直接作用於微生物而將其殺死,同時不應損害製品的質量,常用的方法有:

  (一)氣體滅菌法 製藥工業上用於菌的氣體,多用環氧乙烷。

沸點為10.9℃,室溫下氣,在水中溶解度很大,1ml水中可溶195ml(20℃,760mmHg),易穿透塑料,紙板及固體粉末,暴露於空氣中環氧乙烷就可從這些物質消散,環氧乙烷對大多數固體呈惰性。環氧乙烷的殺菌作用,由於其為烷化劑的性質,使菌體蛋白的-COOH,-NH2,-SH,-OH,的H,被-CH2-CH2-OH所換。可用以滅菌塑料容器,對熱敏感的固體藥物,紙或塑料包裝的藥物,橡膠製品、注射筒,注射針頭,衣著敷料及器械等。但是,一些塑料、皮革及橡膠與環氧乙烷有強親和力,故需長達12-24小時通空氣驅除。中國曾用環氧乙烷對苄黴素普魯卡因進行滅菌,效果良好。

  環氧乙烷具可燃性,當與空氣混合,空氣含量達3.0%(v/v)時即可爆炸。故應用時需用惰性氣體二氧化碳或氟利昂稀釋。環氧乙烷的吸入毒性較大與氨相近,無氨樣的剌激嗅味,損害皮膚及眼粘膜,可產生水泡或結膜炎,故應用時要注意。

  用環氧乙烷來菌的程序,大致為將滅菌物品置於滅菌器內后,減壓排除空氣,預熱,環氧乙烷採用混合氣,一般用環氧乙烷12%氟利昂88%或用環氧乙烷10%二氧化碳90%,在減下輸入混合氣,保持一定濃度、濕度、及溫度,以過一定時間后,抽真空排除環氧乙烷,然後送入無菌空氣完全排除環氧乙烷的濃度為850-900mg/L(3小時、45℃)45mg/L(5小時,45℃),相對濕度以40%-60%為宜濕度為22-55℃。

  在藥劑工作中,也常利用一些化學藥劑的蒸??,每立方米空間用40%甲醛溶液30m1室內相對濕度宜高,以增進甲醛氣體滅菌效果。甲醛對粘膜有強性激性,滅菌后剩餘的甲醛氣體可排除或通入氨予以吸收。亦有採用丙二醇作室內空氣滅菌者,丙二醇具有不揮發性和無引火性等特點,滅菌用量為1ml/m3,將丙二醇置蒸發器中加熱,使蒸氣瀰漫全室。也有用乳酸蒸氣滅菌者用量為2ml/m3,殺菌力雖不及甲醛,但對人無害,此外,還有使用三甘醇(Triethyene glyool HO-(CH2)2-O-(Ch2)2-O-(Ch2)2-OH)的,三甘醇是無色粘稠液體,沸點285℃,溶於水使用方法與丙二醇同,也有報導,過酣酸用於車間的室內菌,效力比相同濃度的甲醛大兩倍半,對粘膜,眼部無剌激性,對木製品、金屬製品、醫療器械均無影響。

  (二)應用化學殺菌劑 在製劑工業上應用化學殺菌劑,其目的在於減少微生物的數目,以控制無菌狀況至一定水平。化學殺菌劑並不能殺死芽胞,僅對繁殖體有效。化學殺菌劑的效果,依賴於微生物的種類及數目,物體表面光滑或多孔與否,以及化學殺菌劑的性質。常用的有0.1%-0.2%新潔而來溶液,2%左右的酚或煤酚皂溶液75%酒精等。由於化學殺菌劑常施用於物體表面,也要注意其濃度不要過高,以防其化學腐蝕作用。

  五、無菌操作法

  無菌操作法在技術上並非滅菌操作,因其與滅菌操作有密切聯繫,而於本節內討論。

  無菌操作法,是整個過程式控制制在無菌條件下進行的一種操作方法。某些藥品加熱滅菌后發生變質、變色或降低含量者可採用無菌操作法製備。此種無菌操作,不僅用於注射劑而且對其它的如滴眼劑、海棉劑等用於粘膜和創傷的製劑也均適用。無菌操作室或無菌操作所用的一切用具、材料以及環境,均須應用面所述滅菌法滅菌,操作須在無菌操作室或無操作櫃內進行。

  (一)無菌操作的空氣滅菌 可應用上節《氣體滅菌法》中所述的甲醛、丙二醇、乳酸、三甘醇等。其具體用法不再贅述。藥廠大型無菌操作,常用甲醛溶液加熱熏蒸進行空氣滅菌。將甲醛溶液放入瓶內,逐漸被吸收蒸氣夾層加熱鍋中,甲醛溶液被加熱,甲醛蒸氣經氣出口送入總進風道,由鼓風機吹入無菌操作室,連續3小時后,一般即可將鼓風機關閉。室溫應保持25℃以上,以免室溫過低甲醛蒸氯了聚合而附著於冷表面,濕度應保持60%以上,密閉熏蒸12-24小時以後,再將25%氨水加熱(每m3用8-10ml),從總風道送入氨氣約15分鐘,以吸收甲醛蒸氣,然後開啟總出口排風,並通入經處理過的無菌空氣直到室內無臭氣為止。

  除用上述方法定期進行較徹底的滅菌外,還要對室內的空間、用具(桌椅等)、地面、牆壁等,用3%酚溶液、2%煤酚皂溶液、0.2%新潔而或75%酒精噴洒或擦試。其它用具盡量用熱壓滅菌法或乾熱滅菌法滅菌。每天工作前開啟外線一小時,中午休息時間也要開1/2-1小時。

  (二)無菌操作 操作人員進入操作之前要洗澡並換上已經滅菌的工作服和清潔的鞋子,不使頭髮、內衣等露出來,以免造成污染機會。安瓿要150-180℃2-3小時乾熱滅菌。橡皮塞要以121℃1小時熱壓滅菌。有關器具、機器都要經過滅菌。用無菌操作法製備的注射劑,大多要加入抑制。

  小量無菌製劑的製備,也可在無菌操作櫃中進行。無菌操作櫃分小型無菌操作與聯合無菌無操作兩種小型無菌操作櫃又稱單人無菌櫃。式樣有單面式與雙面式兩種。操作櫃的架子用木製,四周配以玻璃,前面操作下裝木板,挖二圓孔,孔內密接橡皮手套或袖套。藥品及用具等,由側門送入櫃內后關閉。操作時可完全與外界空氣隔絕。櫃內空氣的滅菌,可在櫃中央上方裝一小型紫外線燈,使用前1小時啟燈滅菌,或用藥液(如3%酚溶液)噴霧滅菌。聯合無菌操作櫃是由幾個小型操作櫃聯合製成,以使原料的精製,傳遞分裝及成品暫時存放等工作全部在櫃內進行。近年來,採用層流潔凈工作台作無菌操作,使用方便,效果可靠。

  六、無菌檢查法

  藥劑或藥品經滅菌或無菌操作法處理后,需經無菌檢驗證實已無微生物生存,方能作用。

  法定的無菌檢查法,包括有試管接種法和薄膜過濾法,其具體操作方法以及在一些特殊情況下的變動,可詳見《中國藥典》附錄中的無菌檢查法。薄膜過濾用於無菌檢查的突出優點,在於可濾過較大量的樣品可濾除抑菌性物質,濾過後的薄膜,即可直接接種於培養基管中,或直接用顯微鏡觀察,故此法靈敏度高,不易產生假陰性結果,檢測次數減少,節省培養基,操作比較簡單。
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