標籤: 暫無標籤

薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上,形成一薄層進行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。

1 簿層層析 -1.薄層層析的特點

薄層層析在應用與操作方面的特點與柱層析的比較。

 

2 簿層層析 -2.吸附劑的選擇

薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區別在於薄層層析要求吸附劑(支持劑)的粒度更細,一般應小於250目,並要求粒度均勻。用於薄層層析的吸附劑或預製薄層一般活度不宜過高,以Ⅱ~Ⅲ級為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細而定,薄層粒度越細,展開距離相應縮短,一般不超過10厘米,否則可引起色譜擴散影響分離效果。

  

3 簿層層析 -3.展開劑的選擇

薄層層析,當吸附劑活度為一定值時(如Ⅱ或Ⅲ級),對多組分的樣品能否獲得滿意的分離,決定於展開劑的選擇。中草藥化學成分在脂溶性成分中,大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。但在實際工作中,經常需要利用溶劑的極性大小,對展開劑的極性予以調整。

  

4 簿層層析 -4·特殊薄層

針對某些性質特殊的化合物的分離與檢出,有時需採用一些特殊薄層。

  ① 熒光薄層:有些化合物本身無色,在紫外燈下也不顯熒光,又無適當的顯色劑時,則可在吸附劑中加入熒光物質製成熒光薄層進行層析。展層後置於紫外光下照射,薄層板本身顯熒光,而樣品斑點處不顯熒光,即可檢出樣品的層析位置。常用的熒光物質多為無機物。其一是在 254nm紫外光激發下顯出熒光的,如錳激潔的硅酸鋅。另一種為在365nm紫外光激發下發出熒光的,如銀激化的硫化鋅硫化鎬。

  ② 絡合薄層:常用的有硝酸銀薄層,用來分離碳原子數相等而其中C一C雙鍵數目不等的一系列化合物,如不飽和醇、酸等。其主要機理是由於C一C鍵能與硝酸銀形成絡合物,而飽和的C一C鍵則不與硝酸銀絡合。因此在硝酸銀薄層上,化台物可由於飽和程度不同而獲得分離。層析時飽和化合物由於吸附最弱而Rf最高,含一個雙鍵的較含兩個雙鍵的Rf值高,含一個三鍵的較含一個雙鍵的Rf值高。此外,在一個雙鍵化台物中,順式的與硝酸銀絡合較反式的易於進行。因此,還可用來分離順反異構體。

  ③ 酸鹼薄層和PH緩衝薄層:為了改變吸附劑原來的酸鹼性,可在鋪制薄層時採用稀酸或稀鹼以代替水調製薄層。例如硅膠帶微酸性,有時對鹼性物質如生物鹼的分離不好,如不能展層或拖尾,則可在鋪薄層時,用稀鹼溶液0.1~0.5NNa0H溶液製成鹼性硅膠薄層。例如豬屎豆鹼在以硅膠為吸附劑時,以氯仿-丙酮一甲醇(8:2:1)為展開劑Rf<0.1,採用鹼性硅膠薄層用上述相同展開劑,Rf值增至0.4左右。說明豬屎豆鹼為--鹼性生物鹼。

 

5 簿層層析 -5.應用

薄層層析法在中草藥化學成分的研究中,主要應用於化學成分的預試、化學成分的鑒定及探索柱層分離的條件。

  用薄層層析法進行中草藥化學成分預試,可依據各類成分性質及熟知的條件,有針對性地進行。由於在薄層上展層后,可將一些雜質分離,選擇性高,可使預試結果更為可靠。

  以薄層層析法進中草藥化學成分鑒定,最好要有標準樣品進行共薄層層析。如用數種溶劑展層后,標準品和鑒定品的Rf值、斑點形狀顏色都完全相同,則可作初步結論是同一化合物。但一般需進行化學反應或紅外光譜等一種儀器分析方法加以核對。

  用薄層層析法探索柱層分離條件,是實驗室的常規方法。在進行柱層分離時,首先考慮選用何種吸附劑與洗脫劑。在洗脫過程中各個成分將按何種順序被洗脫,每一洗脫液中是否為單一成分或混合體,均可由薄層的分離得到判斷與檢驗。通過薄層的預分離,還可以了解多組分樣品的組成與相對含量。如在薄層上摸索到比較滿意的分離條件,即可將此條件用於干柱層析。但亦可以將薄層分離條件經適當改變,轉至一般往層所採用洗脫的方式進行製備柱分離。利用薄層的預分離尋找柱層的洗脫條件時,假定在薄層上所測得的Rf值一樣品在柱層中的比移率(R)。這是由於在薄層展開時,薄層固定相中所含的溶劑經過不斷的蒸發,而使薄層上各點位置所含的溶劑量是不等的,靠近起始線的含量高於薄層的前沿部分。但若嚴格控制層析操作條件,則可得到接近真實的Rf值。用薄層進行某一組分的分離,其Rf值範圍,一般情形下為0.85>Rf>0.05。此外,薄層層析法亦應用於中草藥品種、藥材及其製劑真偽的檢查、質量控制和資源調查,對控制化學反應的進程,反應副產品產物的檢查,中間體分析,化學藥品及製劑雜質的檢查,臨床和生化檢驗以及毒物分析等,都是有效的手段。

上一篇[白層]  

相關評論

同義詞:暫無同義詞