紙電泳
紙電泳 (paper electrophoresis )

1概念

根據電泳現象在滲透了緩衝液的濾紙加上電場使物質移動的電泳法。也就是把樣品以帶狀加在作為支持體的濾紙內來檢測其移動和分離的方法。常用以分離性質相似的物質,如各種氨基酸的分離和稀土元素的分離等。  

2儀器裝置

紙電泳的儀器裝置包括電泳槽及電泳儀兩大部分。 電泳槽是進行電泳的裝置,其中包括鉑電極(直徑0.5~0.8cm)、緩衝液槽、電泳介質的支架和一個透明的罩。常見的電泳槽有水平式和懸架式等。電泳儀是提供直流電源的裝置,它能控制電壓和電流的輸出。電泳槽內的鉑電極經隔離導線穿過槽壁與外接電泳儀電源相連,電源為具有穩壓器的直流電源。紙電泳可分為低壓電泳和高壓電泳兩類。低壓電泳的電壓一般在100~500V,電流為 0~150 mA,高壓電泳的電壓一般在500~10 000V,50~400 mA。

3操作

(1) 電泳緩衝液 枸櫞酸鹽緩衝液(pH3.0) 取枸櫞酸 (C6H8O7·H2O)39.04g與枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g,加水4000ml,使溶解。
(2) 濾紙 取色譜濾紙置1mol/L甲酸溶液中浸泡過夜,次日取出,用水漂洗至洗液的pH值不低於4,置60℃烘箱烘乾,備用。可按需要裁成長27cm、寬18cm的濾紙,或根據電泳室的大小裁剪,並在距長度方向一端5~8cm處劃一起始線,每隔2.5~3cm處做一記號備點樣用。 
(3) 點樣 有濕點法和干點法。濕點法是將裁好的濾紙全部浸入枸櫞酸鹽緩衝液(pH3.0)中,濕潤后,取出,用濾紙吸干多餘的緩衝液,置電泳槽架上,使起始線靠近陰極端,將濾紙兩端浸入緩衝液中,然後用微量注射器精密點加供試品溶液,每點10μl,共3點,並留2個空白位置。 干點法是將供試品溶液點於濾紙上,吹乾、再點,反覆數次,直至點完規定量的供試品溶液,然後用噴霧器將濾紙噴濕,點樣處最後噴濕,本法適用於稀的供試品溶液。
(4) 電泳 於電泳槽中加入適量電泳緩衝液,浸沒鉑電極,接通電泳儀穩壓電源擋,調整電壓梯度為18~20V/cm,電泳約1小時45分鐘,取出,立即吹乾,置紫外光燈(254nm)下檢視,用鉛筆劃出紫色斑點的位置。
(5) 含量測定 剪下供試品斑點和與斑點位置面積相近的空白濾紙,剪成細條,分別置試管中,各精密加入0.01mol/L鹽酸溶液5ml,搖勻,放置1小時,用3號垂熔玻璃漏斗濾過,也可用自然沉降或離心法傾取上清液,按各藥品項下的規定測定吸收度,並按吸收係數計算含量。

4應用

紙電泳的設備簡單,應用廣泛,是最早使用的一種電泳技術。最初用於蛋白質,後來也用於氨基酸、核苷酸一些低分子物質,其優點在於或採用濾紙與色素結合的直接電泳圖,或剪下濾紙的任何部分來抽提其中的物質。在早期的生物化學研究中,曾發揮重要作用。由於紙電泳時間長,解析度較差,近年來逐漸為其他快速、簡便、解析度高的電泳技術所代替。
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