1化學性質

分子結構如右圖
Coomassie brilliant blue G-250

  Coomassie brilliant blue G-250

考馬斯亮藍有G250和R250兩種。
考馬斯亮藍G-250在遊離狀態下呈紅色,最大光吸收在465nm;當它與蛋白質結合后變為青色,蛋白質-色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比。
考馬斯亮藍R250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。

2染色

coomassie blue一定範圍內與蛋白質濃度成正比,因此可用於蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立,試劑配製簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質含量,測定蛋白質濃度範圍為0~1 000μg/mL,是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由於與蛋白質的結合反應十分迅速,常用來作為蛋白質含量的測定。考馬斯亮藍R250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。

3測定含量

濃染液
將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50mL 95%乙醇,加入100mL濃磷酸,然後,用蒸餾水補充至200mL,此染液放4℃至少6個月保持穩定。
溶解
將待測樣本溶於100~1緩衝溶液中,該緩衝溶液應與製作標準曲線的緩衝溶液相同(最好用PBS)。
作用
每個樣本加5mL
稀釋的染料結合溶液,作用5~30min。染液與蛋白質結合后,將由紅色變為藍色,在595nm波長下測定其吸光度。注意,顯色反應不得超過30min.

計算

根據標準曲線計算待測樣本的濃度。

4處理方法

考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質通過范德華力結合,反應快速,並且穩定,無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右,皮屑細胞自然衰老脫落即可無礙。
上一篇[離子基]    下一篇 [等電聚焦電泳]

相關評論

同義詞:暫無同義詞