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芽孢染色是利用細菌的芽孢和菌體對染料的親合力不同的原理,用不同染料進行著色,使芽孢和菌體呈不同的顏色而便於區別。芽孢壁厚、透性低,著色、脫色均較困難,因此,當先用一弱鹼性染料,如孔雀綠(malachite green)或鹼性品紅(basicfuchsin)在加熱條件下進行染色時,此染料不僅可以進入菌體,而且也可以進入芽孢,進入菌體的染料可經水洗脫色,而進入芽孢的染料則難以透出,若再用復染液(如番紅液)或襯托溶液(如黑色素溶液)處理,則菌體和芽孢易於區分。

  方法1、


  (1)將培養24小時左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌,作塗片、乾燥、固定。


  (2)滴加3—5滴孔雀綠染液於已固定的塗片上。


  (3)用木夾夾住載玻片在火焰上加熱,使染液冒蒸汽但勿沸騰,切忌使染液蒸干,必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4—5分鐘。這一步也可不加熱,改用飽和的孔雀綠水溶液(約7.6%)染10分鐘。


  (4)傾去染液,待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。


  (5)用番紅水溶液復染1分鐘,水洗至水為無色。


  (6)待乾燥后,置油鏡觀察,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。


  注意


  (1)選用適當菌齡的菌種,幼齡菌尚未形成芽孢,而老齡菌芽孢囊已經破裂。


  (2)加熱染色時必須維持在染液冒蒸汽的狀態,加熱沸騰會導致菌體或芽孢囊破裂,加熱不夠則芽孢難以著色。


  方法2、


  (1)取二支潔凈的小試管,分別加入0.2ml無菌水,再往一管中加入1—2接種環的蠟狀芽孢桿菌的菌苔,另一管中加入1—2接種環的生孢梭菌的菌苔,兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。


  (2)在菌懸液中分別加入0.2ml苯酚品紅溶液,充分混合后,於沸水浴中加熱3—5分鐘。


  (3)用接種環分別取上述混合液2—3環於兩片載玻片上,塗薄,風乾后,將載玻片稍傾斜於燒杯上,用95%乙醇沖洗至無紅色液流出。


  (4)再用自來水沖洗,濾紙吸干。


  (5)取1—2接種環黑色素溶液於塗片處,立即展開塗薄,自然乾燥后,油鏡觀察,在淡紫灰色背景的襯托下,菌體為白色,菌體內的芽孢為紅色。

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