表達載體四部分:目的基因、啟動子、終止子、標記基因
常用細菌質粒進行構建,構建過程中運用限制性核酸內切酶切割出與目的基因相合的末端(多為黏性末端,也有平末端),採用DNA連接酶連接,導入生物體實現表達。標記基因可幫助識別質粒並檢測是否成功整合到染色體DNA中。
表達載體(Expression vectors)就是在克隆載體基本骨架的基礎上增加表達元件(如啟動子、RBS、終止子等),使目的基因能夠表達的載體。如表達載體pKK223-3是一個具有典型表達結構的大腸桿菌表達載體。其基本骨架為來自pBR322和pUC的質粒複製起點和氨苄青霉素抗性基因。在表達元件中,有一個雜合tac強啟動子和終止子,在啟動子下游有RBS位點(如果利用這個位點,要求與ATG之間間隔5-13bp),其後的多克隆位點可裝載要表達的目標基因。

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