負染色法(negative staining)染色處理過程主要並非針對菌體本身,故又稱「襯托染色法」。是一種易於在電子顯微鏡下觀察試樣的微細結構的方法。它是用磷鎢酸鈉、醋酸氧鈾等電子密度高的物質,嵌入生物試樣的間隙,根據產生的對比進行觀察,而非原來意義上的物質染色。它與通常在電子顯微鏡中所得的陽面物像不同,而是陰面物像,因而有此名稱。解像力可達0.5微米以下。
最早由S.Brenner和R.Horne,(1959)用於病毒粒子的觀察,以後利用此法很快地積累了病毒、細菌以及分層蛋白質的微細結構等方面的知識。
負染色法需要使用酸性染料來染色,如伊紅或苯胺黑。因為細菌體表面帶負電,而酸性染料的色原也帶負電,所以色原只能將背景染色。沒有染色的細胞在染色背景下就能很容易的觀察到。在負染色法中,標本不需要熱固定,細胞不會因為化學藥物的影響而變形,對於不易染色的細菌或病毒也能觀察。
負染色法 此種染色法之染色處理過程主要並非針對菌體本身,故又稱「間接染色法」。 所用之染劑系因陰離子呈色,所以無法對同樣帶陰電荷之菌體細胞呈色,而於染色處理時會在細胞周圍形成沉澱,這種情形即稱為陰性或間接染色。又稱背景染色法

1原理

背景染色之實際應用有二,一為標本不需以熱固定,細胞不至因化學藥物之影響而變形,可觀其自然之大小與型態,二乃可藉以觀察不易染色之細菌如螺旋菌。

2操作方法

步驟
①取一小滴苯胺黑染色液,滴於潔凈玻片之一端。
②以無菌操作取一接種環之培養,置入苯胺黑染色液中,混勻。
③取另一玻片(或蓋玻片)其一端置於苯胺黑色液之前,並呈 30 度狀態,向他端推去,使混和液成一薄塗膜。
④將玻片置空氣中乾燥,不宜以熱固定。
⑤以油鏡觀察之。
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