1雙縮脲反應的定義

紫色絡合物分子結構式

  紫色絡合物分子結構式

在鹼性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC-NH-CONH2)能與銅離子(Cu2+)作用,形成紫紅色絡合物(該物質的分子結構式見圖),該反應即雙縮脲反應。
雙縮脲反應是肽和蛋白質所特有的,而為氨基酸所沒有的一種顏色反應。一般分子中含有兩個氨基甲酪基(即肽鍵:-CO-NH-)的化合物與鹼性
銅溶液作用,就會形成紫色或藍紫色絡合物。
註:除-CO-NH-有此反應外,(-CONH2-)、(-CH2-)、(-NH2-)、(-CS-CS-NH2)等基團亦有此反應。

2雙縮脲反應的鑒定

由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在鹼性溶液中發生雙縮脲反應,且顏色深淺與蛋白質的含量的關係在一定範圍內符合比爾定律,而與蛋白質的氨基酸組成及分子量無關,故可用雙縮脲法測定蛋白質的含量(藉助分光光度計可減小誤差)。
雙縮脲反應主要涉及肽鍵,因此受蛋白質特異性影響較小。且使用試劑價廉易得,操作簡便,可測定的範圍為1~10mg蛋白質,適於精度要求不太高的蛋白質含量的測定,能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。干擾此測定的物質包括在性質上是氨基酸或肽的緩衝液,如TrIs緩衝液,因為它們產生陽性呈色反應,銅離子也容易被還原,有時出現紅色沉澱。

3配製雙縮脲試劑的注意事項

雙縮脲試劑由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO4溶液(0.01g/mL)配製而成,配製比例為5:1。但是雙縮脲試劑不用現配現用,先加入NaoH營造鹼性環境,再加入CuSO4.這是與斐林試劑不同的地方之一! 
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